RBM5基因表达载体构建、稳定转染A549细胞系的建立及功能的初步研究

发布时间：2017-09-23 19:10

  本文关键词：RBM5基因表达载体构建、稳定转染A549细胞系的建立及功能的初步研究

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【摘要】：目的:通过构建表达载体、建立稳定转染RNA结合基序5(RNA binding motif 5,RBM5)的A549细胞系,初步研究RBM5基因过表达对A549细胞增殖以及天冬-谷-丙-组氨酸盒多肽15[DEAH box polypeptide 15,DHX15]表达的影响。方法:应用分段克隆法构建pc DNA3.1(+)/RBM5真核表达载体;将测序验证后的重组质粒pc DNA3.1(+)/RBM5转染肺腺癌A549细胞并以G418进行筛选,采用Western印迹鉴定RBM5基因过表达阳性细胞,流式细胞仪分别检测经pc DNA3.1(+)/RBM5稳定转染的A549细胞[pc DNA3.1(+)/RBM5-A549]及pc DNA3.1(+)空白质粒转染的A549细胞[pc DNA3.1(+)-A549]的周期分布;运用RT-PCR技术分别检测pc DNA3.1(+)/RBM5-A549和pc DNA3.1(+)-A549细胞中剪接相关因子DHX15的表达情况。结果:成功构建出pc DNA3.1(+)/RBM5真核表达载体,筛选出RBM5基因稳定转染过表达阳性细胞株;pc DNA3.1(+)/RBM5-A549较pc DNA3.1(+)-A549细胞处于G1期细胞比例增大、S期细胞比例减小(均P0.01);c DNA3.1(+)/RBM5-A549较pc DNA3.1(+)-A549细胞的DHX15表达上调(P0.01)。结论:成功构建重组质粒pc DNA3.1(+)/RBM5,并建立了RBM5稳定转染的A549细胞系;初步证实RBM5基因过表达可抑制肺腺癌A549细胞的细胞周期,并使DHX15表达上调。
【作者单位】： 中南大学湘雅医院老年病科;中南大学湘雅三医院医学科研中心;
【关键词】： RNA结合基序 A细胞系 天冬-谷-丙-组氨酸盒多肽 基因克隆 质粒构建 肿瘤抑制 细胞周期
【基金】：湖南省科技计划项目(06SK3029-7)~~
【分类号】：R363
【正文快照】： Construction of RBM5 vector,establishment of stablytransfected A549 cell line and preliminary researchon the function of RBM5 geneXIAO Jian1,LI Nian1,XING Xiaowei2,HE Bixiu1(1.Department of Geriatrics,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha 41

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本文编号：906971