多重PCR-SSP技术应用于HPA-1~17bw基因分型研究和广西壮族人群HPA多态性的分布

发布时间：2017-09-26 17:03

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【摘要】：目的建立应用于HPA-1~17bw基因分型的多重聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对广西壮族人群HPA多态性分布进行调查。方法设计多种HPA序列特异性引物的组合,在1个PCR反应体系中同时扩增多个HPA基因,根据扩增片断的有无和大小,指定相应的HPA基因型,并以17例国际合作研究项目提供的HPA参比DNA配组标本,以及100例已知HPA型的血小板供者的DNA标本作验证。使用验证后的技术对2659名无血缘关系的广西壮族人群展开HPA-1~17bw的基因分型和抗原多态性研究。结果建立了由16种PCR引物混合液,其中有6种多重PCR引物混合液组成的PCR-SSP反应体系,可用于HPA-1~17bw等位基因的检测。以HPA参比DNA配组标本,以及已知HPA型的供者的DNA标本的检测作验证,HPA分型结果完全一致;在2 659名广西壮族人群中各HPA等位基因频率分布为:HPA-1a和-1b为0.991 5和0.008 5,HPA-2a和-2b为0.956 9和0.043 1,HPA-3a和-3b为0.512 2和0.487 8,HPA-5a和-5b为0.985 0和0.015 0,HPA-6a和-6b为0.985 1和0.014 9,HPA-15a和-15b为0.525 6和0.474 4;HPA-4、HPA-7~14bw、HPA-16~17bw只有a/a的纯合子;HPA-2~3、HPA-6bw以及HPA-15均存在a/a和b/b纯合子基因型个体。结论多重PCR-SSP技术应用于HPA基因分型减少了PCR扩增反应数量,节省了人力、物力,HPA分型系统性强,可用于大量标本的HPA-1~17bw基因分型等研究和筛查工作;应用该方法研究证明广西壮族人群HPA多态性分布具有民族特征,有助于对壮族人群血小板免疫学特点的了解。
【作者单位】： 南宁输血医学研究所;美国国立卫生研究院;
【关键词】： 人类血小板特异性抗原(HPA) HPA基因分型 多重PCR-SSP 壮族 广西
【基金】：广西科学研究与技术开发计划项目(主席基金)(081 60-05) 南宁市科学研究与技术开发计划项目(201003048C-2) 广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(Z2010197)
【分类号】：R394
【正文快照】： 自1959年第1个人类血小板特异性抗原(HPA)被鉴定至今,已使用血小板同种抗体(抗-HPA)检测出35个血小板抗原[1,2]。抗-HPA是造成同种免疫血小板减少症的直接原因,可以导致新生儿同种免疫血小板减少症(NAIT)、新生儿同种免疫血小板减少紫癜(NAITP)、输血后紫癜(PTP)、被动性血小

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