siIRE1α重组腺病毒对内质网应激介导凋亡的影响

发布时间：2017-09-27 20:28

  本文关键词：siIRE1α重组腺病毒对内质网应激介导凋亡的影响

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【摘要】：目的构建内质网跨膜蛋白肌醇酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)基因干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒,并探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)状态下其对C2C12细胞增殖凋亡的影响。方法人工合成靶向IRE1α的siRNA序列,连接到穿梭载体pSES-HUS上,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中进行同源重组,得到pAdSES-HUS-IRE1αsiRNA重组质粒。通过脂质体介导在HEK293细胞中包装并扩增重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA,在C2C12细胞中采用RT-PCR和Western blot检测其干扰效果,并通过FCM法和MTT检测Tm诱导ERS时病毒对C2C12细胞增殖凋亡的影响(分为4组:NC组、Tm单独处理组、Tm+Ad-RFP组和Tm+AdIRE1αsiRNA组),Western blot检测C2C12细胞中Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达。结果成功获得了病毒滴度约为4.3×1011PFU/mL的重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA。RT-PCR和Western blot检测结果表明,该重组腺病毒有效地抑制了C2C12细胞中IRE1α的表达。FCM检测结果表明,ERS条件下,Tm+Ad-IRE1αsiRNA组S期的细胞比例分别比Tm单独处理组和Tm+Ad-RFP组升高12.62%和14.80%(P0.05);凋亡率比Tm单独处理组和Tm+Ad-RFP组降低16.64%和16.26%(P0.05)。MTT实验结果与Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表达与FCM结果一致。结论重组腺病毒Ad-IRE1αsiRNA在C2C12细胞中能有效抑制IRE1α的表达;ERS状态下,RNA干扰IRE1α基因可促进C2C12细胞的增殖,抑制其凋亡。
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室;
【关键词】： IREα RNA干扰 重组腺病毒 CC细胞 增殖和凋亡
【基金】：国家自然科学基金(81371928,81171697) 教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-12-1090) 重庆市高等学校优秀人才支持计划(渝教人2011-65)~~
【分类号】：R3416
【正文快照】： 真核细胞的内质网主要负责膜蛋白和分泌性蛋白的合成、翻译后修饰以及折叠等。当大量的未折叠蛋白在内质网内聚集时,超出内质网的处理能力,内质网的内稳态就会遭到破坏,导致内质网应激(endoplasmicreticulum stress,ERS),随即激活一系列的保护性反应,以维持内质网的稳态,即未

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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【共引文献】

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本文编号：931776