铜绿假单胞菌外膜蛋白F及B型鞭毛蛋白与VP22融合DNA疫苗免疫效力和感染保护作用的研究

发布时间：2017-10-01 01:12

  本文关键词：铜绿假单胞菌外膜蛋白F及B型鞭毛蛋白与VP22融合DNA疫苗免疫效力和感染保护作用的研究

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【摘要】：目的:评价I型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSV-1)间层蛋白VP22能否增强铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)外膜蛋白F(the outer membrane protein F,OprF)及B型鞭毛蛋白(type B flagellins,FlaB)的体液、细胞免疫效力和感染保护作用。方法:1.动物免疫:(1)提取DNA疫苗pVAX1-VP22、pVAX1-OprF、pVAX1-OprF-VP22、pVAX1-FlaB、pVAX1-FlaB-VP22;(2)用体内转染试剂介导将疫苗肌肉注射BALB/c小鼠,免疫三次后制备小鼠抗血清,分离脾脏T淋巴细胞。2.体液免疫:间接ELISA检测IgG1与IgG2a抗血清效价的比值。3.细胞免疫:(1)CCK-8检测T淋巴细胞的增殖活性;(2)ELISPOT检测细胞因子IFN-γ和IL-4分泌水平。4.感染保护实验:(1)腹腔注射PA于FlaB/VP22疫苗免疫后的BALB/c小鼠,构建铜绿假单胞菌肺部感染模型,一周后分离肺组织;(2)肺组织匀浆活菌计数评价肺部PA感染程度;(3)HE染色观察肺组织病变情况。结果:1.体液免疫:间接ELISA结果显示,pVAX1-OprF-VP22、pVAX1-OprF、pVAX1-FlaB-VP22和pVAX1-FlaB组小鼠血清均产生了特异性IgG1、IgG2a抗体,而pVAX1-VP22组和PBS组则为阴性。pVAX1-OprF-VP22组抗血清效价IgG2a/IgG1的比值显著高于pVAX1-Opr F组(P0.05),pVAX1-FlaB-VP22组抗血清效价IgG2a/IgG1的比值显著高于pVAX1-FlaB组(P0.05),Th细胞免疫应答分型倾向于Th1型。2.细胞免疫:(1)CCK-8检测T淋巴细胞的增殖活性,pvax1-oprf-vp22组刺激指数(si)显著高于pvax1-oprf组(p0.05),pvax1-oprf组显著高于pvax1-vp22组和阴性对照(pbs)组,pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组之间无显著差异(p0.05);pvax1-flab-vp22组刺激指数(si)显著高于pvax1-flab组(p0.05),pvax1-flab组显著高于pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组,pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组之间无显著差异(p0.05)。(2)elispot检测可分泌ifn-γ和il-4的t淋巴细胞数目,pvax1-oprf-vp22组分泌ifn-γ的t细胞显著高于pvax1-oprf组,pvax1-oprf组显著高于pvax1-vp22组和阴性对照(pbs)组,pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组之间无显著差异(p0.05);pvax1-flab-vp22组分泌ifn-γ的t细胞数显著高于pvax1-flab组(p0.05),pvax1-flab组显著高于pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组,pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组之间无显著差异(p0.05)。所有免疫组分泌il-4的t细胞数都很低。3.感染保护实验:(1)肺组织匀浆活菌计数结果显示,pvax1-flab-vp22组显著低于pvax1-flab组(p0.05),pvax1-flab组显著低于pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组,pvax1-vp22组与阴性对照(pbs)组之间无显著差异(p0.05)。(2)肺组织病理he染色切片显微镜下可观察到,pvax1-vp22组和pbs对照组肺组织感染严重,肺泡结构消失,间质增生,支气管腔内大量组织坏死。pvax1-flab组肺泡结构较完整,支气管腔和间质内有中性粒细胞、浆细胞等大量炎症细胞浸润。pvax1-flab-vp22组可见部分红细胞产生,有充血现象。结论:1.vp22可显著增强单表达抗原oprf与flab的在小鼠体内诱导特异性体液和细胞免疫反应的效力,且更倾向于细胞免疫(th1型)。2.腹腔注射可成功建立铜绿假单胞菌肺部感染模型,VP22与FlaB融合表达的DNA疫苗可在一定程度上预防PA感染。
【关键词】：铜绿假单胞菌 VP22 DNA疫苗 外膜蛋白F 鞭毛蛋白B 免疫应答 肺部感染模型
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-13
• 前言13-17
• 第一部分 铜绿假单胞菌外膜蛋白F及B型鞭毛蛋白与VP22融合DNA疫苗免疫效力的研究17-33
• 实验材料17-18
• 实验方法18-25
• 结果25-33
• 第二部分 铜绿假单胞菌B型鞭毛蛋白与VP22融合DNA疫苗免疫抑制小鼠肺部铜绿假单胞菌感染的研究33-40
• 实验材料33-34
• 实验方法34-37
• 结果37-40
• 讨论40-46
• 结论46-47
• 参考文献47-52
• 综述：铜绿假单胞菌耐药机制研究进展52-61
• 参考文献58-61
• 附录61-66
• 个人简历66

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本文编号：951476