抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究

发布时间：2017-10-02 17:26

  本文关键词：抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究

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【摘要】：人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。
【作者单位】： 湖南师范大学生命科学学院;湖南师范大学医学院;
【关键词】： 人巨细胞病毒 Pp蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31072141) 湖南省科技计划重点项目(No.2011SK2014) 长沙市科技计划重点项目(No.K1104047-31) 湖南省自然科学基金重点项目(12JJ2013) 湖南省科技计划项目(2013SK3129) 湖南省高等学校科学研究项目(No.10B060)
【分类号】：R392
【正文快照】： HCMV是一种核酸大小约235 kb的双链DNA病毒,属疱疹病毒科β属。HCMV感染极为普遍[1],多数感染者无临床症状,但是母亲孕期感染可以导致胎儿感染,通过血液可以进入各种靶器官,导致多系统脏器损伤(如肺炎、少数为肝炎和脑炎),存活者伴随着神经性耳聋、智力低下及其它神经系统后遗

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本文编号：960902