Smad3促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬

发布时间：2017-10-04 04:24

  本文关键词：Smad3促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬

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【摘要】：目的探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响。方法 21d SD雌性大鼠腹腔注射孕马血清20 IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养。培养细胞分为3组:空白对照组:培养液中不加任何处理因素;敲低实验组:培养液中加入Smad3基因特异性的SiRNA及转染试剂RNAiMAX;过表达实验组:培养液中加入Smad3真核表达质粒及转染试剂Lipo 2000。免疫细胞化学方法鉴定培养细胞纯度;Western blotting方法检测Smad3蛋白表达变化,检测转染效率。Smad3基因敲低及过表达后,Western blotting方法检测自噬体膜形成标志蛋白LC3B及自噬调控相关蛋白Bcl-2的蛋白表达变化。结果 Smad3敲低时,LC3B蛋白Ⅱ型与Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)变化不明显,Bcl-2蛋白表达明显降低;Smad3过表达时,LC3BⅡ/Ⅰ明显增加,Bcl-2蛋白表达明显增加。结论Smad3基因特异的SiRNA及真核表达质粒可以有效地转入大鼠卵巢颗粒细胞中,Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬,其机制可能与Bcl-2蛋白相关。
【作者单位】： 北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系;
【关键词】： Smad 卵巢颗粒细胞 自噬 免疫组织化学 免疫印迹法 大鼠
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30772344)
【分类号】：R363
【正文快照】： 颗粒细胞是组成卵泡的最大细胞群,颗粒细胞的增殖与凋亡对卵泡的发育成熟及闭锁等密切相关。卵泡的发育过程不仅仅与颗粒细胞增殖与凋亡相关,与颗粒细胞的自噬也密切相关[1],微管相关蛋白1轻链3(LC3)是自噬体膜形成的标记蛋白,可以通过检测其表达来评价细胞内的自噬水平。卵泡

【共引文献】

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本文编号：968610