体外诱导人iPS细胞向肾脏细胞定向分化的实验研究

发布时间：2017-10-04 07:36

  本文关键词：体外诱导人iPS细胞向肾脏细胞定向分化的实验研究

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【摘要】：目的探讨人诱导性多能干细胞(iPS)体外定向分化为肾脏细胞的方法,为应用干细胞进行肾脏再生治疗奠定实验基础。方法以正常人iPS细胞为实验对象,运用生肾因子活化素A(Activin-A)、骨形成蛋白7(BMP7)、人血管内皮生长因子(hVEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、锂盐、维甲酸(RA)等细胞因子联合肾脏上皮细胞培养液对iPS进行定向诱导肾脏细胞分化,分别于诱导后第14、21和28日,细胞免疫荧光染色及Real-Time PCR检测肾脏发育相关蛋白Brachyury(Bry)、Paired box gene 2(Pax2)、水通道蛋白1(AQP1)和E-钙粘素(E-cad)蛋白及mRNA的表达水平,RT-PCR检测分化各阶段多能性基因Nanog和OCT4的表达水平。结果诱导培养液分别诱导14、21和28 d后,细胞免疫荧光染色观察发现;分化后的细胞分别表达Bry、Pax2、AQP1和E-cad蛋白,而在未分化的iPS细胞中未见表达。Real-Time PCR结果显示:诱导后细胞中Bry、Pax2、AQP1、E-cad mRNA的表达分别较未分化的iPS细胞上调了4、30、37和25倍(P0.05),分化各阶段多能性基因OCT4和Nanog的表达水平逐渐下调(P0.05)。结论细胞因子联合肾脏上皮细胞培养液可有效诱导人iPS细胞定向分化为肾脏细胞。
【作者单位】： 上海交通大学附属第六人民医院四肢显微外科研究所;中山大学附属第六医院检验科;
【关键词】： 细胞因子 分化 诱导性多能干细胞 肾脏细胞
【基金】：国家自然科学基金(81170640,30960385)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 慢性肾脏疾病是临床常见的多发病之一。据最新流行病学调查[1]显示,目前我国慢性肾脏疾病患者高达1.2亿,患病率高达10.8%,且呈现逐年不断增长的趋势。肾脏移植术是临床最有效的治疗手段,但该技术存在供体短缺、同种异体排斥反应和终身服用免疫抑制剂等问题。因此,寻找到具有强

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本文编号：969414