结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂高通量筛选模型的建立与应用

发布时间：2017-10-05 13:32

  本文关键词：结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂高通量筛选模型的建立与应用

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【摘要】：目的建立1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型,从不同来源的样品中筛选该酶抑制剂,以期获得作用于该靶点的全新作用机制的抗结核药物先导物。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,克隆基因dxr构建重组表达质粒pET28a(+)::dxr;IPTG诱导表达并经Ni2+亲和层析柱纯化得到具有天然酶活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶;基于该酶促反应底物NADPH在340nm波长下具有光吸收的原理,建立和优化酶活测定体系,构建并评价酶抑制剂的高通量筛选模型;应用此模型进行酶抑制剂筛选并进行抑酶活性及抗菌活性评价。结果成功得到具有天然酶活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶,构建了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型并得到3个抑酶活性较高的阳性化合物,其中化合物IMB-DXR-B1为该酶的反竞争性抑制剂,其Ki值为6.2μmol/L,IC50为29.5μmol/L,该化合物对于结核分枝杆菌H37Rv的MIC为32μg/mL。结论成功构建了稳定性好、灵敏度高的结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型,筛选得到具有抗结核活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂,为获得全新作用靶点的新型抗结核药物奠定了基础。
【作者单位】： 北京协和医学院中国医学科学院医药生物技术研究所;宁夏医科大学基础医学院;
【关键词】： 结核分枝杆菌 -脱氧-D-木酮糖--磷酸还原异构酶 筛选模型 抑制剂
【基金】：十二五国家重大专项“重大新药创制”(2012ZX09301002-003/001-014) 中央级公益性科研院所基本科研业务专项基金(IMBF201206)
【分类号】：R378
【正文快照】： 结核病是目前仅次于艾滋病的世界第二大致死性传染性疾病。据WTO统计,仅2012年就有860万新增结核病病例,约有130万人因此而死亡。耐药、多药耐药以及广泛耐药结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)的不断出现与传播是导致结核病的高死亡率最主要的原因。面对结核耐药问

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本文编号：977082