小鼠IL-35基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定

发布时间：2017-10-05 23:00

  本文关键词：小鼠IL-35基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定

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【摘要】：目的构建小鼠IL-35基因靶向shRNA干扰的慢病毒表达载体,抑制小鼠肝癌细胞Hepa1~6中IL-35的表达。方法 设计合成IL-35EBI3亚基基因靶向shRNA序列,构建shRNA载体PLKO.1-IL-35 EBI3shRNA-GFP,测序正确后,三质粒病毒包装系统(质粒载体+psPAX2+pMD2.G)包装成表达干扰IL-35 EBI3 shRNA的慢病毒,慢病毒感染靶细胞Hepa1~6,荧光显微镜下观察感染效率,以实时定量RT-PCR分析对Hepa1~6细胞IL-35 EBI3基因表达的干扰效果。结果 测序证实,成功构建了真核表达干扰载体PLKO.1-IL-35 EBI3shRNA-GFP;并成功包装出表达干扰IL-35 EBI3 shRNA的慢病毒,以MOI值4.6pfu/细胞感染Hepa1~6细胞,镜下显示感染效率约90%;RT-PCR结果表明所构建的3个慢病毒载体PLKO.1-IL-35 EBI3 shRNA-GFP均可以有效干扰IL-35 EBI3的表达,其中E545干扰效率最高,为64%.结论 成功构建IL-35EBI3亚基基因的shRNA慢病毒表达载体,该慢病毒表达载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。
【作者单位】： 潍坊医学院免疫学教研室;
【关键词】： IL- EBI shRNA 慢病毒
【基金】：山东省自然科学基金项目(课题编号:ZR2009CM019) 山东省教育厅资助课题(课题编号:J10LF62)
【分类号】：R346
【正文快照】： IL-35是2007年发现的由调节性T细胞(regulato-ry T cells,Treg)特异性产生的抑制性细胞因子⑴。人类和小鼠IL-35都是由EB病毒诱导基因3(epstein barr virus induced gene3,EBI3)和IL-12p35亚基组成的异源二聚体。另外EBI3和IL-27p28可组成异源二聚体IL-27;IL-12p35和IL-12p40

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