恶性疟原虫ApiAP2蛋白与var基因内含子序列相互作用的体内鉴定

发布时间：2017-10-06 22:08

  本文关键词：恶性疟原虫ApiAP2蛋白与var基因内含子序列相互作用的体内鉴定

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【摘要】：目的鉴定恶性疟原虫ApiAP2蛋白家族成员PF3D7_1107800与var基因内含子保守序列(iNPE)存在体内相互结合作用。方法提取恶性疟原虫标准株3D7基因组DNA,PCR扩增PF3D7_1107800基因5′端片段。扩增产物经双酶切后连接入原核表达载体pGex-4T-1,重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况,谷胱甘肽亲和层析纯化重组蛋白。20只BALB/c小鼠分为重组蛋白免疫组和PBS对照组,每组10只,免疫组小鼠每鼠背部皮下注射纯化的重组蛋白100μl(约含蛋白20μg),对照组小鼠注射等量PBS,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周处死小鼠,收集血清。重组纯化蛋白G(Protein G)纯化2组小鼠血清,Western blotting鉴定免疫血清抗体情况。染色质免疫沉淀(ChIP)获得恶性疟原虫DNA,qPCR检测PF3D7_1107800蛋白抗体组在C类var基因的内含子区域的富集情况。结果 PCR扩增PF3D7_1107800基因5′端片段结果显示,在约345 bp处有一特异性条带,与理论值相符。重组表达载体pGEX-4T-1-PF3D7_1107800N经测序表明构建成功。重组蛋白经诱导表达和纯化后,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,所获的重组蛋白为目的蛋白,其相对分子质量(Mr)约为37 000,与预测值一致。重组蛋白免疫小鼠后,获得抗体血清,Western blotting分析结果显示,血清中抗体可与重组蛋白特异结合,在约Mr200 000处有一目的条带,与预测值一致。ChIP实验产物经qPCR分析显示,在var基因内含子区域的相对富集程度为内参seryl-tRNA合成酶基因区域的2倍以上。结论恶性疟原虫ApiAP2家族成员PF3D7_1107800可在体内与C类var基因内含子区域结合。
【作者单位】： 同济大学传染病与疫苗研究所;
【关键词】： 恶性疟原虫 ApiAP var基因 内含子调控蛋白
【基金】：国家自然科学基金(No.31271388) 中央高校基本科研业务费专项资金~~
【分类号】：R382
【正文快照】： 目前疟疾仍是全球主要的公共卫生问题,每年的疟疾死亡病例达百万以上[1]。感染人类的疟原虫主要有4种,其中恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)引起的恶性疟对人类造成的危害最为严重。因此,恶性疟原虫致病相关毒力因子的研究一直是国际上疟疾研究的热点[2-4]。恶性疟原虫红细

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张青锋;潘卫庆;;恶性疟原虫Var基因家族的变异调控机制[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2007年04期

2 方小楠;;恶性疟原虫var基因家族与抗原变异研究进展[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2010年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杨永焱;王秋生;;疟疾预防的现状及进展[J];海南医学;2014年04期

2 李节;何永蜀;杨照青;;恶性疟原虫var基因相关研究新进展[J];热带医学杂志;2009年02期

3 李星潘;梁韶晖;;蚊唾液腺功能蛋白研究进展[J];热带医学杂志;2013年11期

4 张霞;巨红妹;王云华;李雅杰;;蓝氏贾第鞭毛虫沉默信息调节因子2(Sir2)基因的克隆、表达与纯化[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2011年03期

5 张霞;巨红妹;李雅杰;;沉默信息调节因子2与基因转录调控[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2011年06期

6 Segun Isaac Oyedeji;Henrietta Oluwatoyin Awobode;Chiaka Anumudu;J，

本文编号：985264