人免疫缺陷病毒1型包膜蛋白gp120制备及中和单抗筛选

发布时间：2022-12-10 15:34

　　获得性免疫缺陷综合症（AIDS）,即艾滋病,由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染人体引起,导致机体免疫系统功能障碍,进而引发各种并发症的疾病。自1981年HIV被发现至今已经将近四十多年的历史,但目前依然没有有效的疫苗或者药物能够彻底预防和治愈艾滋,而且全球HIV感染者病例每年仍在增长。截止2016年底,全球约有3670万人感染HIV,同时在2016年全球约有100万人死于艾滋相关的疾病。因此,研制HIV的疫苗或药物成为迫在眉睫的艰巨任务。随着人们对HIV病毒深入认识,对于HIV疫苗的研究,人们从最初单纯倾向于依赖机体细胞免疫反应或者单纯依赖体液免疫来产生广谱中和抗体,这两个方向来进行HIV疫苗的研究,到现在人们在之前失败的经验中,认识到必需同时结合细胞免疫和体液免疫才能够有希望研制出安全有效的HIV疫苗。近些年的研究也表明,HIV病毒在人体内的清除过程,除了依赖细胞免疫,同时更重要的是机体能够产生广谱中和抗体。而且人们也认识到,HIV-1的膜蛋白gp120是广谱中和抗体的主要中和表位。本研究中,将7种不同型别的HIV-1gp120蛋白基因序列,包括NL4-3-gp120、89.6-gp1... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
Abbreviations
第一章 前言
    1. AIDS流行情况
        1.1 AIDS全球流行情况
        1.2 AIDS中国流行情况
    2. HIV生物学特征
        2.1 HIV分类
        2.2 HIV结构和基因组
        2.3 HIV生活周期
    3. HIV-1广谱中和表位
        3.1 CD4结合位点
        3.2 V1/V2
        3.3 V3
        3.4 gp120/gp41交界面
        3.5 MPER
    4. HIV-1疫苗研究发展历史与现状
        4.1 HIV疫苗在免疫学上的可行性
        4.2 HIV疫苗所面临的挑战
        4.3 HIV疫苗研究发展进展
    5. 本研究的思路及目的、意义
第二章 材料与方法
    1. 材料
        1.1 仪器和设备
        1.2 质粒、菌株、细胞株、蛋白、抗体、实验动物
        1.3 常用试剂与耗材
        1.4 常用实验溶液配置
    2. 方法
        2.1 分子克隆实验方法
        2.2 抗原表达
        2.3 蛋白的鉴定
        2.4 蛋白的纯化
        2.5 动物实验
        2.6 Tzm-b1细胞中和实验
        2.7 中和单抗筛选及制备
        2.8 中和单抗鉴定
第三章 结果与分析
    1. 膜蛋白gp120表达与鉴定
        1.1 不同型别的gp120膜蛋白表达质粒构建
        1.2 不同型别的gp120膜蛋白表达纯化
        1.3 不同型别的gp120膜蛋白性质鉴定
        1.4 本节小结
    2. 小鼠免疫、免疫血清监测与中和单抗制备及其性质鉴定
        2.1 膜蛋白NL4-3-gp120免疫方案
        2.2 不同免疫阶段小鼠免疫血清与膜蛋白NL4-3-gp120结合活性检测
        2.3 不同免疫阶段小鼠免疫血清与膜蛋白NL4-3 HIV-1病毒中和滴度检测
        2.4 单克隆抗体制备
        2.5 单克隆抗体与不同型别gp120反应性的ELISA检测
        2.6 单克隆抗体中和能力检测
        2.7 本节小结
    3. 中和单抗10G6、4A6、3C1、1E1关键氨基酸分析
        3.1 中和单抗对NL4-3-gp120以及V3融合蛋白的Western Blot检测
        3.2 中和单抗对不同截短V3合成肽的ELISA检测
        3.3 本节小结
    4. 中和单抗10G6、4A6、3C1、1E1性质差异性分析
        4.1 中和单抗对NL4-3型别HIV病毒的免疫荧光检测
        4.2 中和单抗10G6中和能力受N-聚糖影响分析
        4.3 中和单抗中和能力受CD4影响比较
        4.4 本节小结
第四章 讨论
    1. 免疫原的选择
    2. 免疫策略的设计
    3. 中和抗体的筛选方法
小结与展望
    1. 小结
    2. 展望
参考文献
在校期间科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]通过流式分选技术筛选HIV-1特异性单个B细胞[J]. 李丹,鞠斌,王硕,李亚锋,梁华,邵一鸣.  中国热带医学. 2016(11)
[2]Merck Ad5艾滋病疫苗的研究进展[J]. 刘强,王佑春.  中国生物制品学杂志. 2011(01)
[3]大鼠杂交瘤技术及抗HIV、HBsAg大鼠单克隆抗体的制备[J]. 方家椿,M.Bodeus,G.Burtonboy.  生物工程学报. 1991(01)



本文编号：3717018