MicroRNAs在HBV相关的慢加急性肝衰竭患者肝组织和外周血清中的表达及其在临床预后判断作用

发布时间：2017-05-20 17:20

  本文关键词：MicroRNAs在HBV相关的慢加急性肝衰竭患者肝组织和外周血清中的表达及其在临床预后判断作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过研究Micro RNAs(mi RNAs)在HBV相关慢加急性肝衰竭患者(HBV-related Acute-on-Chronic Liver Failure,HBV-ACLF)肝组织和外周血清表达,探讨mi RNA能否作为一种新型、无创的HBV-ACLF预后判断标记物。同时,拟从mi RNA靶基因水平初步探讨HBV-ACLF潜在发病机制。方法对1例HBV-ACLF患者的肝组织和1例年龄、性别相匹配的正常供肝组织,利用micro RNA芯片技术,筛选差异性表达mi RNAs。应用实时荧光定量PCR(Real-Time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR),验证上述差异性表达的mi RNAs在肝组织(HBV-ACLF患者8例,正常对照8例)中的表达,并进一步检测其在血清标本(HBV-ACLF39例,正常对照20例)中的表达情况。将前述39例HBV-ACLF患者依据3个月内临床转归情况,分为恢复组(n=20)和未恢复组(n=19,其中9例死亡,10例行肝移植术),比较HBV-ACLF不同预后组患者血清中mi RNA差异性表达,分析差异表达的mi RNA与MELD评分、PTA、INR等肝衰竭预后模型或指标的相关性,并进一步采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)评价mi RNA对HBV-AC LF预后评估的诊断价值。利用常用靶基因预测软件(mi RWalk,Target Scan和mi Randa),对预后相关mi RNA的靶基因进行预测,q RT-PCR检测HBV-ACLF患者肝组织中相应靶基因表达,从靶基因水平初步探讨mi RNA参与HBV-ACLF发病的可能信号通路。结果(1)micro RNA芯片筛选结果显示,与正常对照相比,HBV-ACLF肝衰竭肝组织mi RNA表达上调89条,下调99条(差异性表达均≥5倍)。结合mi RNA与肝病的相关文献,筛选出9条差异性表达mi RNAs(表达上调的是mi RNA-21、mi RN A-130a、mi RNA-143、mi RN A-200,表达下调的是mi RNA-486-5p、mi RN A-192、mi RN A-194、mi RNA-148、mi RNA-122)做进一步研究。(2)在8例HBV-ACLF患者和8例年龄、性别相匹配的正常对照组,q RT-PCR检测表明,与正常肝组织相比,HBV-ACLF患者肝组织中mi RN A-130a、mi RN A-486-5p及mi RNA-200表达上调,mi RN A-192,mi RNA-148及mi RN A-122表达下调,且均有统计学意义(p0.05);除mi RNA-486-5p外,这与micro RNA筛选结果一致。在39名HBV-ACLF患者和20名年龄、性别相匹配的正常对照组血清中,q RT-PCR检测结果显示:与正常对照组相比,除mi RN A-194以外,8条mi RN As(mi RNA-21,mi RNA-130a,mi RN A-486-5p,mi RN A-192,mi RN A-148,mi RNA-143,mi RNA-122,mi RNA-200)在HBV-ACLF患者血清中表达均显著上调,且有统计学意义(p0.05)。(3)依据3个月内不同临床转归分组,发现mi RNA-130a和mi RNA-486-5p在恢复组HBV-ACLF患者血清中均表达上调(p0.05)。进一步统计分析显示,在HBV-ACLF患者中,mi RNA-130a与INR(r=-0.38,p=0.03)、PT(r=-0.41,p=0.02)和MELD评分(r=-0.39,p=0.03)负相关,与PTA(r=0.36,p=0.05)正相关。而mi RNA-486-5p与上述凝血指标及MELD评分无相关性(p0.05)。ROC评价mi RNA-130a对HBV-ACLF患者3个月的存活的预测作用,mi RNA-130a、MELD评分ROC曲线下面积(AUC)分别为0.74(95%CI0.571-0.91,p=0.02),0.86(95%CI 0.720-0.991,p=0.00),且两者之间无统计学差异(p=0.163)。以上结果提示mi RNA-130a对HBV-ACLF预后判断有较好的价值。(4)靶基因预测软件(mi RWalk,Target Scan和mi Randa)分析显示,糖原合成酶激酶(Glycogen synthase kinase,GSK)为mi RNA-130a的靶基因。利用q RT-PCR,检测11例HBV-ACLF,6例年龄、性别相匹配的正常肝组织中GSK表达情况,发现与正常供肝相比,HBV-ACLF患者肝组织中GSK表达有下调趋势(p=0.078)。结论(1)血清mi RNA-130a在HBV-ACLF患者肝组织和血清中均表达上调,并且与其预后相关,推测mi RNA-130a可作为一种无创的HBV-ACLF预后评估指标。(2)在体内mi RNA调节网络中,mi RNA-130a可能通过对靶基因GSK的调节参与HBV-ACLF的发病。
【关键词】：miRNA-130a HBV-ACLF 预后 靶基因 GSK
【学位授予单位】：首都医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.3;R512.62
【目录】：

• 英文缩略语对照表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-12
• 研究对象与方法12-20
• 结果20-28
• 讨论28-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 文献综述Mi RNA在肝病中作用的研究进展36-43
• 参考文献40-43
• 攻读学位期间发表文章43-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

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本文编号：382328