北京基因型结核杆菌脂聚糖对T淋巴细胞分化的调节作用研究

发布时间：2024-06-29 22:48

　　目的:本研究以北京基因型结核分枝杆菌临床株的脂阿拉伯甘露聚糖(BJLAM)为研究对象,通过BJ-LAM与人外周血单个核细胞体外共培养,然后检测上清液中的细胞因子。探讨BJ-LAM对T淋巴细胞分化的调控作用,也为BJ-LAM的进一步应用提供可靠的理论参考。方法:菌株筛选:于2018年6月20日从武汉市医疗救治中心一例临床结核患者的痰标本中,筛选到了一株结核分枝杆菌临床分离株(WH322636),用分枝杆菌特异性引物ITS和RD105区域缺失法进行基因鉴定。LAM的提取、纯化:用Triton X-114提取临床分离株WH322636、耻垢分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、结核分枝杆菌H37Ra的粗提物,用葡聚糖凝胶柱对粗提物进行纯化;得到的LAM通过聚丙烯酰氨凝胶电泳联合硝酸银染色进行显色,初步判断四种LAM结构的大小。北京型结核分枝杆菌LAM对T淋巴细胞功能的调节作用:从武汉市医疗救治中心筛选出30例肺结核患者(其中菌阴结核患者19人),12例健康人作对照。抽取受检者静脉血2ml,提取PBMC,用纯化的LAM(BCG-LAM、BJ-LAM)刺激42个受试者的PBMC细胞,培养48h后检测PBMC...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 结核分枝杆菌入侵机体机制
    1.3 抗结核细胞免疫
        1.3.1 抗原呈递细胞
        1.3.2 CD4⁺T淋巴细胞
    1.4 结核病免疫相关细胞因子
        1.4.1 IFN-γ
        1.4.2 白介素10
        1.4.3 白介素17
    1.5 结核病诊断技术的进展
    1.6 结核分枝杆菌相关糖脂研究现状
    1.7 北京家族结核菌株研究现状
    1.8 研究目的及意义
2 脂阿拉伯甘露聚糖的分离和纯化
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 试剂和材料
        2.2.1 主要仪器和设备
        2.2.3 溶液的配制
        2.2.4 菌株来源
    2.3 实验方法
        2.3.1 菌种培养及鉴定
        2.3.2 菌种基因型鉴定
        2.3.3 脂聚糖的提取及纯化
        2.3.4 结核分枝杆菌胞壁粗糖纯化
        2.3.5 结核分枝杆菌胞壁脂阿拉伯甘露聚糖SDS-PAGE凝胶电泳
        2.3.6 脂阿拉伯甘露聚糖的鉴定
    2.4 结果
        2.4.1 菌种培养
        2.4.2 菌种基因型鉴定
        2.4.3 脂阿拉伯甘露聚糖经12%SDS-PAGE结合硝酸银染色结果
        2.4.4 分离纯化的脂阿拉伯甘露聚糖的鉴定
    2.5 讨论
3 北京型结核分枝杆菌LAM对 T淋巴细胞免疫功能的影响
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 主要试剂和耗材
        3.2.2 主要仪器设备
        3.2.3 研究对象来源
        3.2.4 样本入选
        3.2.5 样本信息登记
    3.3 实验方法
        3.3.1 实验准备
        3.3.2 检测不同LAM对 PBMC分泌细胞因子能力的影响
        3.3.3 ELISA检测细胞培养上清中
        3.3.4 统计学方法
    3.4 结果
        3.4.1 LAM刺激病人PBMC细胞因子的分泌结果
        3.4.2 BJ-LAM刺激对不同分组的PBMC细胞分泌IL-17
        3.4.3 BJ-LAM刺激PBMC细胞分泌IL-10、IFN-γ
    3.5 讨论
4 结论
5 本研究的不足之处
6 展望
参考文献
致谢
攻读学位期间的研究成果



本文编号：3998010