长春地区特发性矮小儿童SHOX基因突变检测与分析

发布时间：2017-10-10 20:17

  本文关键词：长春地区特发性矮小儿童SHOX基因突变检测与分析

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【摘要】：研究目的： 特发性矮小(idiopathic short stature，，ISS)是指原因不明的身材矮小，是儿童期身材矮小的最常见原因。在最能决定儿童身高的各种因素中，遗传因素起着主要作用。矮小同源盒基因（short stature homcobox-coniaining，SHOX）编码蛋白作为转录激活因子在促进生长发育过程中起重要调控作用，SHOX基因异常与ISS有极大地相关性，且存在一定区域性差别。本研究对长春地区确诊为ISS患儿进行发育相关SHOX基因突变检测，并分析其与生长相关因子IGF-1之间的关系，为探讨ISS的发病机制及对ISS患儿筛查提供一定的理论依据。 研究方法： 1．研究对象：病例组来源于2010年1月至2012年12月在长春市儿童医院内分泌门诊已确诊为ISS的患者，共计209例,其中男孩130例，女孩79例。对照组来源于2010年1月至2012年12月在长春市儿童医院健康体检中心进行体格检查的健康儿童,共计50例，其中男孩31例，女孩19例。 2．随机抽取30例ISS患儿和30例正常儿童，采用酚氯仿抽提法提取全血DNA，应用聚合酶链反应（PCR）扩增SHOX基因外显子2，利用测序仪对PCR产物进行测序，并与GENEBANK中SHOX基因的标准序列进行比对。 3．采用酶联免疫吸附试验测定研究对象血清中IGF-1水平，分别对正常对照组、SHOX异常和ISS患儿组无SHOX异常血清中的IGF-1水平进行组间两两比较，确定IGF-1与SHOX基因突变的关系。 实验结果： 1．所选取的研究对象，性别和年龄构成比无统计学差异。 2．常规提取DNA，利用PCR扩增SHOX基因外显子2序列，并对扩增后的产物进行鉴定。结果显示：在目的条带相应分子量位置扩增条带清晰。进一步测序可见：正常对照组SHOX基因测序未发现C缺失，无碱基转换的改变。30例ISS患儿中发现SHOX基因异常为10例（33.3%），其中8例SHOX基因存在C缺失；2例SHOX基因突变。 3．ISS患儿血清IGF-1水平明显低于正常对照组，差别具有统计学意义；ISS患儿无基因突变组的血清IGF-1水平明显低于正常对照组，差别具有统计学意义；ISS患儿基因突变组的血清IGF-1水平明显低于正常对照组，差别具有统计学意义；ISS患儿基因突变组的血清IGF-1水平不明显低于基因无突变组，差别不具有统计学意义。 结论： 1．长春地区特发性矮小患者中，存在SHOX基因突变，该突变可能是长春地区ISS患儿病因之一。 2．特发性矮小患儿中血清IGF-1水平明显降低，IGF-1水平与特发性矮小疾病的发病相关。 3．通过对ISS患儿SHOX基因突变的检测及其与血清IGF-1关系分析，为探讨长春地区特发性矮小儿童分子生物学发病机制，进一步深入开展特发性矮小儿童基因筛查奠定基础。
【关键词】：特发性矮小 SHOX基因 基因突变 IGF-1
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文缩写对照10-11
• 第1章 绪论11-17
• 1.1 特发性矮小简介11-14
• 1.1.1 特发性矮小定义11
• 1.1.2 特发性矮小的病因及发病机制11-12
• 1.1.3 流行病学调查12
• 1.1.4 特发性矮小的诊断12-14
• 1.1.5 特发性矮小的治疗14
• 1.2 特发性矮小与 IGF-1 和 SHOX 基因的关系14-16
• 1.2.1 特发性矮小与 IGF-1 的关系14-15
• 1.2.2 特发性矮小与 SHOX 基因的关系15-16
• 1.3 研究目的及意义16-17
• 第2章 材料与方法17-22
• 2.1 主要试剂与仪器17-18
• 2.1.1 主要试剂17
• 2.1.2 主要仪器17-18
• 2.2 研究对象18-19
• 2.2.1 研究对象18
• 2.2.2 病例纳入标准18-19
• 2.2.3 病例排除标准19
• 2.2.4 实验分组19
• 2.2.5 样本采集19
• 2.3 SHOX 基因测序19-21
• 2.3.1 PCR 引物设计与合成19
• 2.3.2 样本 DNA 提取19-20
• 2.3.3 PCR 扩增目的基因20
• 2.3.4 SHOX 基因测序结果分析20-21
• 2.4 血清 IGF-1 的测定21
• 2.5 统计学分析21
• 2.6 质量控制21-22
• 第3章 结果22-29
• 3.1 ISS 组与正常儿童对照组性别构成比较22
• 3.2 ISS 组与正常儿童对照组年龄比较22
• 3.3 PCR 扩增 SHOX 基因第 2 外显子产物的鉴定结果22-23
• 3.4 SHOX 基因外显子 2 PCR 扩增 DNA 测序结果23-27
• 3.5 研究对象血清 IGF-1 变化情况27-29
• 3.5.1 ISS 患儿组与正常对照组血清 IGF-1 比较结果27
• 3.5.2 ISS 患儿无基因突变组与正常对照组血清 IGF-1 比较结果27
• 3.5.3 ISS 患儿基因突变组与正常对照组血清 IGF-1 比较结果27-28
• 3.5.4 ISS 患儿基因突变组与无基因突变组血清 IGF-1 比较结果28-29
• 第4章 讨论29-35
• 4.1 ISS 患儿 SHOX 基因突变情况29-33
• 4.1.1 SHOX 基因结构29-30
• 4.1.2 SHOX 基因突变与特发性矮小30-32
• 4.1.3 SHOX 基因测序对诊断 ISS 的意义32-33
• 4.2 ISS 患儿与血清 IGF-1 水平的关系33-35
• 第5章 结论35-36
• 参考文献36-40
• 作者简介及取得科研成果40-41
• 致谢41

【参考文献】

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本文编号：1008399