LAMP与PCR技术在儿童肺炎支原体检测中的应用及昆明地区肺炎支原体流行病学分析

发布时间：2017-10-21 18:02

  本文关键词：LAMP与PCR技术在儿童肺炎支原体检测中的应用及昆明地区肺炎支原体流行病学分析

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【摘要】：目的：肺炎支原体是引起儿童支原体肺炎的主要病原体,也是儿童呼吸道感染的常见病原体之一。临床上常用血清学检测方法与其他常见呼吸道病原体嗜肺军团菌(Legionella Pneumophila, LP)、Q热立克次体(Coxiella burnetii, CB)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae, CP)、腺病毒(Adenoviridae, ADV)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)、甲型流感病毒(Influenza A virus)、乙型流感病毒(Influenza B virus)和副流感病毒(HPIVs)共同检测。肺炎支原体感染常见于儿童,成人中也可感染。临床上肺炎支原体可通过红霉素,四环素与氯霉素等大环内酯类抗生素进行控制与治疗。是否能够准确的检测出致病病原,从而采取有效措施进行疾病防控,这一直是目前的研究重点。分子生物学检测技术已经广泛用于临床诊断,其中PCR技术目前已经研究得十分成熟。相比之下环介导等温扩增(LAMP)属于近20年来新发展的分子生物学检测技术。本试验建立LAMP检测肺炎支原体的方法,与PCR技术对比,讨论两种方法的特点以及特异性及敏感度。方法：通过LAMP引物专业软件设计4条引物,建立起LAMP检测肺炎支原体的方法；让检测样本与常见的呼吸道病原体嗜肺军团菌与腺病毒同时进行LAMP反应,验证所设计LAMP检测方法的特异性。对标准量的MP-DNA以加倍稀释的方法同时进行LAMP及PCR反应,对比两种方法的敏感度。结论：结果显示LAMP特异性强,在嗜肺军团菌与腺病毒共同进行LAMP反应中无扩增；LAMP在检测肺炎支原体的实验中敏感度高于PCR,LAMP技术可检测稀释10-4的样本,而PCR可检测出稀释10-2的样本,LAMP技术在检测肺炎支原体上的敏感度高于PCR。目的：肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae, MP)是儿童社区获得性肺炎的常见病原体,全年均可发病。其最常见的临床表现为呼吸道症状,如发热,咳嗽,气喘等,还可引起多种肺外并发症,如脑炎,心肌炎,皮肤伤害,泌尿系统及消化道受累等症状,少数患儿可同时发生多种并发症,若不及时干预,严重者可危及生命。本次对我院2014年度因肺炎住院的患儿的实验室检测数据进行统计分析,旨在为临床早期合理诊断与治疗提供科学依据。方法：选取2014年1月-2014年12月被诊断为肺炎的住院患儿,收集到3256例患儿的血清,运用间接免疫荧光技术(Indirect immunofluorescence assay.IIFA)检测MP特异性抗体MP-IgM。结果：在3256例小儿血清中春季阳性率为10.6%,夏季为14.2%,秋季为25.8%,冬季为35.1%。平均发病率为21.4%,通过SPSS 17.0分析数据可以得知四季发病率间有统计学意义(P0.05),其中秋冬季检出率明显高于其他两季,差异具有统计学意义。1岁的阳性率为8%；1-3岁阳性病例为108例,阳性率为13%；3-6岁阳性率为21%；6岁阳性率为22%。我们通过SPSS17.0(P0.05)分析可得不同年龄间的数据有统计学意义,其中3-6岁以上的儿童的发病率明显高于其他的年龄组,差异具有统计学意义。结论：昆华医院入院的肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia, MPP)患儿中,秋冬季为高发期,.其中3-6岁的患儿为易感人群。
【关键词】：肺炎支原体 环介导等温扩增 聚合酶链反应 肺炎 儿童 肺炎支原体 肺炎支原体肺炎 年龄 季节
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 第一部分 摘要6-7
• Part Ⅰ Abstract7-8
• 第二部分 摘要8-9
• Part Ⅱ Abstract9-13
• 缩略词13-15
• 第一部分 LAMP与PCR技术在儿童肺炎支原体检测中的应用15-41
• 第一章 绪论15-28
• 1.1 病原学15-16
• 1.2 肺炎支原体常见的保守序列16-17
• 1.2.1 P1基因16
• 1.2.2 P30基因16
• 1.2.3 P116基因16-17
• 1.3 诊断方法的研究进展17-20
• 1.3.1 分离培养法17
• 1.3.2 血清学检测方法17-19
• 1.3.3 分子基因检测方法19-20
• 1.4 恒等温扩增方法简介20-26
• 1.4.1 聚合酶链式反应(PCR)21
• 1.4.2 核酸等温扩增技术21-23
• 1.4.3 环节导恒等温扩展技术原理23-25
• 1.4.4 环节导恒等温扩增技术的特点25-26
• 1.4.5 环介导等温扩增技术的应用26
• 1.5 研究目的及意义26-28
• 第二章 材料与方法28-35
• 2.1 材料与仪器28-29
• 2.1.1 主要试剂28
• 2.1.2 试剂的配制28-29
• 2.2 实验仪器29-30
• 2.3 实验方法30-31
• 2.3.1 标本来源30-31
• 2.3.2 PCR引物的设计31
• 2.4 样本采集与DNA的提取31-32
• 2.5 反应体系优化32-33
• 2.5.1 PCR反应体系32
• 2.5.2 LAMP反应体系32-33
• 2.6 特异性检测33
• 2.7 敏感度检测33-35
• 2.7.1 LAMP反应的敏感度检测33-34
• 2.7.2 PCR反应的敏感度检测34-35
• 第三章 实验结果与分析35-38
• 3.1 PCR反应的构建35
• 3.2 LAMP反应的构建35-36
• 3.3 LAMP特异性的研究36
• 3.4 PCR反应的敏感度36-37
• 3.5 PCR反应的敏感度37-38
• 第四章 讨论38-40
• 第五章 结论与展望40-41
• 5.1 结论40
• 5.2 展望40-41
• 第二部分 昆华医院肺炎支原体发病情况的分析41-59
• 第一章 绪论41-50
• 1.1 流行病学41
• 1.2 MP传播途径及临床表现41-44
• 1.2.1 MP传播途径41-42
• 1.2.2 MP临床表现42-44
• 1.3 致病机理的研究44-46
• 1.4 肺炎支原体的防控46-47
• 1.5 其他地区肺炎支原体流行病学调查47-48
• 1.6 研究目的及意义48-50
• 第二章 材料与方法50-52
• 2.1 材料50
• 2.1.1 血清的采集50
• 2.2 临床血清学检测方法50-51
• 2.3 实验室检测结果判定51
• 2.3.1 阳性结果判定51
• 2.3.2 阴性结果判定51
• 2.4 临床资料的收集51
• 2.5 统计学分析51-52
• 第三章 实验结果与分析52-56
• 3.1 肺炎支原体肺炎诊断标准52
• 3.2 实验室检验结果的判定52-53
• 3.3 不同季节的感染情况53-54
• 3.4 不同年龄段的感染情况54-56
• 第四章 讨论56-58
• 第五章 结论与展望58-59
• 5.1 结论58
• 5.2 展望58-59
• 参考文献59-68
• 致谢68-70
• 文献综述70-74
• 参考文献72-74
• 附录A 论文发表74-75
• 附录B 其他需要说明内容75

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本文编号：1074602