柯萨奇病毒B3感染Hela细胞后Bax、Bim、Caspase-3及Caspase-9 mRNA及蛋白的表达

发布时间：2017-10-22 21:31

  本文关键词：柯萨奇病毒B3感染Hela细胞后Bax、Bim、Caspase-3及Caspase-9 mRNA及蛋白的表达

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【摘要】：目的观察CVB3感染Hela细胞后促凋亡基因Bax、Bim Caspase-3及caspase-9mRNA和蛋白表达的变化。 方法将Hela细胞分为未予CVB3感染的对照组和CVB3感染的病毒组,取3h、6h、9h、12h、24h共5个时间点,采用RT-PCR、 Western Blot分别检测Bax、Bim、Caspase-3及caspase-9mRNA和蛋白的表达。 结果1.Bax、Bim、Caspase-3及Caspase-9mRNA在对照组和病毒组Hela细胞中均有表达,且在各自组内差异均无显著性(P0.05)；病毒组Bax、Bim mRNA表达在24h时间点均低于对照组(P0.05)。对照组与病毒组中Caspase-3、Caspase-9mRNA在组内各时间点间的表达差异均无显著性(P0.05)；病毒组Caspase-9mRNA表达较在24h时间点较对照组降低(P0.05),而Caspase-3mRNA表达组间各时间点比较差异无显著性(P0.05)。 2. Bax、Bim、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达在对照组中各时间点均有表达,但差异均无显著性(P0.05)。在病毒组中,Bax蛋白在24h时间点表达下降,与组内各时间点比较差异均有显著性(P0.05),且病毒组表达明显低于对照组(P0.05)；Bim蛋白表达随感染时间延长而下降(P0.05),且组间比较9h、12h、24h时间点蛋白表达病毒组低于对照组(P0.05)。病毒组Caspase-3及Caspase-9蛋白表达均在24h点明显降低(P0.05),且低于对照组24h时间点(P0.05)；此外在对照组中Cleaved Caspase-9蛋白表达在12h点明显高于其他各时间点(P0.05)；病毒组Cleaved Caspase-9蛋白表达在3h及6h点与9h、12h、24h时间点间比较差异有显著性(P0.05),组间比较9h、12h时间点明显高于对照组(P0.05)、而24h点明显低于对照组(P0.05)；将Cleaved Caspase-9蛋白表达值与Caspase-9蛋白表达值比较,对照组中Cleaved Caspase-9/Caspase-9表达在12h时间点增高,差异有显著性(P0.05),病毒组中Cleaved Caspase-9/Caspase-9表达在3h、6h、9h各时间点比较,差异无显著性(P0.05),但是随感染时间的延长表达增强,至12h时间点出现增高,24h时间点明显增强。 结论1.CVB3感染Hela细胞后Bax、Bim mRNA在24h时间点表达降低；Bax蛋白表达在病毒感染后24h时间点明显降低,而Bim蛋白表达随感染时间延长而下降,至24h时间点明显下降。 2.CVB3感染Hela细胞后Caspase-3mRNA表达无明显变化,而Caspase9mRNA在24h时间点表达降低；Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均在病毒感染后24h时间点降低,而Cleaved Caspase-9蛋白表达在病毒感染后12h时间点最强。 3. Bax、Bim、Caspase-3、Caspase-9均在CVB3诱导的Hela细胞凋亡中发挥作用。
【关键词】：Hela细胞 柯萨奇病毒B3 Bax Bim Caspase-3 Caspase-9
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.1
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 符号说明11-12
• 1 绪论12-15
• 2 材料和方法15-24
• 2.1 实验材料15-16
• 2.1.1 细胞与病毒株15
• 2.1.2 主要试剂15-16
• 2.1.3 主要试剂的配置16
• 2.2 实验仪器和设备16-17
• 2.3 实验方法17-23
• 2.3.1 CVB3病毒扩增17
• 2.3.2 CVB3病毒毒力的测定17
• 2.3.3 实验模型的建立17-18
• 2.3.4 Hela细胞中总RNA的提取18-19
• 2.3.5 RNA的鉴定19
• 2.3.6 cDNA的合成19-20
• 2.3.7 RT-PCR的扩增20-21
• 2.3.8 RT-PCR反应产物的电泳鉴定21
• 2.3.9 总蛋白的提取21
• 2.3.10 蛋白电泳凝胶的制备21-22
• 2.3.11 电泳22
• 2.3.12 转膜22
• 2.3.13 封闭22
• 2.3.14 孵育一抗22-23
• 2.3.15 洗脱23
• 2.3.16 孵育二抗23
• 2.3.17 第2次洗脱23
• 2.3.18 显色反应23
• 2.4 数据处理和统计学分析23-24
• 3 结果24-34
• 3.1 CVB3感染Hela细胞后Bax、Bim的表达24-27
• 3.1.1 CVB3感染Hela细胞后Bax mRNA的表达24-25
• 3.1.2 CVB3感染Hela细胞后Bax蛋白的表达25
• 3.1.3 CVB3感染Hela细胞后Bim mRNA的表达25-26
• 3.1.4 CVB3感染Hela细胞后Bim蛋白的表达26-27
• 3.2 CVB3感染Hela细胞后Caspase-3、Caspase-9的表达27-34
• 3.2.1 CVB3感染Hela细胞后Caspase-3 mRNA的表达27-28
• 3.2.2 CVB3感染Hela细胞后Caspase-3蛋白的表达28-29
• 3.2.3 CVB3感染Hela细胞后Caspase-9 mRNA的表达29-30
• 3.2.4 CVB3感染Hela细胞后Caspase-9和Cleaved Caspase-9蛋白表达30-34
• 4 讨论34-38
• 4.1 细胞的选择34
• 4.2 CVB3感染Hela细胞后,Bax、Bim表达的变化34-36
• 4.3 CVB3感染Hela细胞后, Caspase-3、Casapse-9表达的变化36-38
• 5 结论38-39
• 参考文献39-42
• 综述42-52
• 参考文献47-52
• 攻读学位期间主要的研究成果目录52-53
• 致谢53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1080229