胆道闭锁肝病理学诊断价值及热休克蛋白47与肝纤维化相关性研究

发布时间：2017-10-28 07:33

  本文关键词：胆道闭锁肝病理学诊断价值及热休克蛋白47与肝纤维化相关性研究

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【摘要】：研究背景：胆道闭锁(biliary atresia, BA)是儿童最常见的严重肝脏疾病之一。BA主要表现为肝内外胆管不同程度的炎症和纤维化梗阻,进而导致肝内胆汁淤积以及进行性加重的肝脏纤维化。目前,虽然BA患儿可以通过Kasai手术重建胆汁流出道,但仍有约68%～80% BA患儿在术后存在各级胆管进行性梗阻及炎症损伤,导致胆汁淤积和肝纤维化加重,进展为肝功能衰竭,最终需要接受肝脏移植。因此,早期诊断与手术及对肝纤维化发展趋势的准确判断对提高BA患儿长期预后具有关键性作用。目前对于胆道闭锁的诊断主要依据临床表现、血生化、肝胆B超及同位素等指标综合评估,缺乏一定的特异性和敏感性,且术前没有明确指标能够对患儿肝脏纤维化及预后进行评估。国外有学者报道肝脏病理组织学活检能够作为术前诊断BA的可靠标准,诊断准确率高达88.2-95%,并可通过相关病理学改变推测患儿预后。而现阶段国内有关BA病理学诊断标准及其改变与预后相关性研究十分有限。肝脏纤维化进展程度是影响BA患儿Kasai术后长期预后的一项重要因素,前期研究证实热休克蛋白(heat shock protein, HSP)47在BA肝脏组织中表达明显上调,结合有关HSP47在肝硬化、肺纤维化、心肌梗塞、肾小球肾炎等多种器官胶原异常聚集的纤维化疾病中均有表达的文献报道,提示HSP47与器官纤维化进程密切相关。研究目的：1.结合国外胆道闭锁(BA)肝脏病理半定量标准,初步建立我国相应的BA肝脏病理半定量评分标准以及预后指标,探讨肝脏病理学半定量评分系统在BA术前早期诊断中的价值,分析肝脏病理评估参数与BA预后的相关性,为BA预后的判断提供可靠依据；2.研究热休克蛋白47(HSP47)在BA患儿肝脏组织及血清中的表达变化,分析HSP47与BA肝组织纤维化程度的相关性,探讨HSP47作为BA预后随访指标的可行性。材料与方法：一、胆道闭锁(BA)肝脏病理学评分的诊断价值及与预后相关性探讨：1.病例入组标准及预后评估标准：收集复旦大学附属儿科医院外科2012年6月至2013年7月间收治入院手术的96例梗阻性黄疸患儿入组,根据术中胆道造影诊断结果将患儿分为BA组共58例(Ⅲ型)与非BA组共28例(除外PFIC、胆道发育不良、Allagie综合征)。分别记录各组病例性别、年龄、术前与术后肝功能及术后随访等临床资料。同时选取入组病例术后肝脏组织苏木精一伊红(hematoxylin-eosinstaining, HE)染色病理切片各1张并随机编号,由一名对诊断结果未知的专业病理医师解读病理切片,运用基于8个病理特征(肝脏纤维化、胆小管增生、汇管区胆栓形成、胆汁淤积、肝细胞病变、汇管区炎症细胞浸润、髓外造血、胆管板发育异常),总分为21分的半定量肝脏组织病理评分系统对各组病例肝脏的相关病理特征进行半定量评分,记录得分,做出病理诊断。同时根据BA患儿术后半年血胆红素水平,将入组BA患儿再分为预后良好组(胆红素降至正常水平)与预后不良组(胆红素高于正常水平)。2.比较各组病例肝脏组织病理诊断与术中胆道造影诊断符合率,并分析BA患儿肝脏组织相关病理特征与其预后相关性。二、热休克蛋白47(HSP47)在BA患儿肝脏组织及血清中的表达变化及其与BA患儿肝纤维化程度相关性研究：分别选取20例BA、10例胆汁淤积、10例胆总管囊肿术中活检的肝脏组织及术后肝脏组织病理切片,应用荧光定量RT-PCR和western blot检测各组肝脏组织中HSP47mRNA及蛋白水平表达量变化；同时根据Okhuma's分级标准,光学显微镜下观察各组病例肝脏组织HE染色病理切片,比较各组肝组织纤维化程度；此外,运用ELISA实验检测比较各组患儿血清中HSP47蛋白表达水平变化。分析HSP47与BA肝脏纤维化程度相关性。结果：一、胆道闭锁(BA)肝脏病理学评分的诊断价值及与预后相关性探讨：1.入组96例梗阻性黄疸患儿,根据术中胆道造影诊断,共有58例BA(男性33例,女性26例)及28例胆汁淤积症(男性22例,女性6例),两组患儿平均年龄及性别比无明显差异。BA组患儿总胆红素、碱性磷酸酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶及胆汁酸水平分别为173.9±66.4,605.0±223.4,171.4±114.3,111.9±85.5,与胆汁淤积症组患儿相比,均无显著差异(157.8±64.5,603.6±301.3,140.5±105.7,129.8±116.2),而BA组患儿谷氨酰转肽酶及直接胆红素水平较胆汁淤积组显著较高(859.2±688.5 vs.404.1±400.2,P0.01;134.2±50.1vs.110.5±41.8,P0.05)。2.依据肝脏组织病理学评分(8个特征-21分制),BA组肝脏组织病理学平均评分分值明显高于胆汁淤积组(10.9±2.2 vs.5.9±1.3,P0.001)。ROC曲线分析发现依据肝脏组织病理学评分系统,当评分分值≥8分时,诊断BA的机率随着分值的升高而逐渐增加,其诊断敏感度和特异度分别为93.1%和99.8%,当评分分值8分时,诊断胆汁淤积而非BA得机率则随着分值的升高而逐渐增加,诊断的敏感性和特异度分别为85.7%和99.9%。总体上使用肝脏组织病理学评分系统诊断BA的敏感性、特异性及准确率分别为94.7%、86.2%和91.9%,明显高于传统BA病理诊断方法(敏感性、特异性及准确率：86.4%、74.1%及82.6%；P0.01)。3.BA组肝脏组织病理学评分分值大小与BA患儿性别、总胆红素水平、总胆汁酸无明显相关性(r1=-0.14,P10.05；r2=0.181,P20.05；r3=0.103,P30.05),而与BA患儿的年龄分布、直接胆红素水平及谷氨酰转肽酶水平呈正相关,(r1=0.289,P10.01,r2=0.272,P20.01,r3=0.367,P30.01)。4.所有BA组患儿均存在不同程度的肝脏组织纤维化,以中度肝脏纤维化以上为主,肝纤维化率及程度较胆汁淤积组明显,后者仅有14.2%患儿存在轻度肝脏组织纤维化；BA组胆管增生率为92.1%,较胆汁淤积组(25%)明显升高；胆栓形成及胆管板发育异常仅见于胆道闭锁组,发生率分别为51.7%%和17.2%,(vs.胆汁淤积组,P0.01)。肝脏纤维化与患儿年龄呈正相关,纤维化程度越严重,提示远期预后不佳。二、热休克蛋白47(HSP47)在BA患儿肝脏组织及血清中的表达变化及其与BA患儿肝纤维化程度相关性研究：1.BA组肝脏组织中HSP47 mRNA水平相对表达量为0.915±0.730较胆汁淤积组及胆总管囊肿组显著增高(0.066±0.037与0.314±0.150,P0.05)；同时HSP47蛋白在BA组肝脏组织中的表达水平明显高于胆汁淤积组及胆总管囊肿组。(3.06181±0.504763 vs 1.358018±0.373174,3.06181±0.504763 vs1.23649±0.350173),差异具有统计学意义(P0.05)。3.BA组患儿血清中HSP47蛋白平均浓度为63.38±17.11,均高于胆汁淤积组(57.87±14.83)及胆总管囊肿组(45.78±11.23)。4.BA组肝脏组织中HSP47 mRNA,蛋白水平表达量与HSP47血清浓度间呈正相关(mRNA水平VS蛋白水平r=0.836,P0.05,蛋白水平VS血清浓度r=0.989,P0.01,mRNA水平VS血清浓度r=0.883,P0.05)。5.结合光镜下观察肝脏组织HE染色切片按照0khuma 's肝纤维化分级标准进行肝纤维化程度分级情况,血清HSP47的表达与肝纤维化程度成正相关,具有统计学意义(r=0.669,P0.01)。与术后半年内胆红素指标是否降至正常内关系不显著,不具备统计学意义,根据随访至今存活情况行Logic回归分析,血清HSP47的表达与术后生存情况存在相关性(χ2=5.417,P=0.020.05)。结论：1.肝组织病理评分(8个特征-21分制)对于BA诊断及BA与其他胆汁淤积症间的鉴别诊断较以往的病理诊断方法具有更高的敏感性、特异性和准确性。2.通过肝脏病理评分系统分析相关病理特征的程度与胆道闭锁患儿预后情况,具备可行性。3.热休克蛋白47在肝脏组织及血清表达具有一致性,表达量与肝脏纤维化程度呈正相关,能够提示胆道闭锁患儿肝脏纤维化程度。4.血清热休克蛋白47的表达情况可能作为随访BA患儿远期预后的监测指标。
【关键词】：胆道闭锁 肝脏病理 评分标准 热休克蛋白47 肝纤维化 预后
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R726.5
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-17
• 参考文献15-17
• 第一部分 胆道闭锁肝脏病理评分系统的诊断价值17-31
• 材料与方法17-20
• 统计学分析20
• 结果20-25
• 讨论25-27
• 小结27-28
• 参考文献28-31
• 第二部分 胆道闭锁热休克蛋白47与肝纤维化的相关性研究31-49
• 材料与方法31-38
• 统计学分析38-39
• 结果39-44
• 讨论44-46
• 小结46-47
• 参考文献47-49
• 结论49
• 创新点49-50
• 中英文缩略词对照表50-51
• 综述51-59
• 参考文献56-59
• 研究生期间文章发表59-60
• 致谢60-61

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