宫内感染致新生鼠支气管肺发育不良中NF-κBp65、TNF-a的变化及地塞米松的干预效应

发布时间：2017-10-29 14:27

  本文关键词：宫内感染致新生鼠支气管肺发育不良中NF-κBp65、TNF-a的变化及地塞米松的干预效应

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【摘要】：目的： 目前认为宫内感染与新生儿支气管肺发育不良关系密切[1]。本研究通过给孕鼠腹腔内注射脂多糖（LPS）建立宫内感染模型，研究宫内感染致新生鼠支气管肺发育不良肺组织中NF-κBp65、TNF-α的表达变化，探讨地塞米松对宫内感染致新生鼠支气管肺发育不良的干预效应。 方法： 1.实验分组：将30只妊娠第17d的孕鼠随机分为生理盐水对照组（NS组）、宫内感染组（LPS组）和地塞米松干预组（DEX组），每组各10只。LPS组于妊娠第17、18d连续2天腹腔内注射脂多糖350μg/kg；DEX组于妊娠第17、18d连续2天腹腔内注射脂多糖350μg/kg，注射脂多糖1h后腹腔内注射地塞米松0.5mg/kg；NS组于相同妊娠时间点腹腔注射等容积的生理盐水。 2.标本收集：造模后分别从三组随机取出2只孕鼠处死，取出胎盘、子宫置于4％中性甲醛中固定，用于HE染色。将自然分娩的新生鼠按照生后第1d、3d、7d、14d四个时间点分别称体重后断头处死，迅速开胸取出肺组织，并用生理盐水洗净，置于滤纸吸干肺组织表面水分后称重，，然后将肺组织置于4%中性甲醛中固定后石蜡包埋，用于HE和免疫组化染色。 3.实验方法：应用HE染色观察各组孕鼠子宫、胎盘的病理变化特点；检测三组新生大鼠的体重、肺重、计算肺指数（肺重／体重）；应用HE染色观察各组新生鼠肺组织病理变化特点；显微镜下计算生后第3d、7d、14d辐射状肺泡计数（Radial alveolar count RA C）。采用免疫组化法检测各组新生鼠生后第1d、3d、7d、14d肺组织中核因子-κBp65（NF-κBp65）及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达。 结果： 1、30只孕鼠进食、活动均正常，无孕鼠发生死亡。孕鼠分娩情况：NS组共获70（70/72）只新生鼠，LPS组共获62（62/69）只新生鼠，DEX组共获63（63/67）只新生鼠。宫内感染组孕鼠胎盘及子宫血管充血、水肿、大量中性粒细胞浸润；生理盐水组孕鼠胎盘及子宫检测均未见明显炎性反应。 2、肺组织的病理变化：宫内感染组新生大鼠生后第3d肺组织可见肺泡数较对照组减少，肺泡膈减少，肺泡结构简单化；生后第14d：肺泡数较对照组仍减少，肺泡膈厚度增加。地塞米松干预组新生大鼠肺组织出现类似的病理变化，但程度减轻。宫内感染组新生大鼠生后第3d、7d、14d肺组织中RAC较对照组减少（P0.05），地塞米松干预后，新生大鼠生后第3d、7d、14d肺组织中RAC较宫内感染组增加（P0.05）。三组新生大鼠肺组织内均未见明显的肺实质纤维化病变。 3、宫内感染后，新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d体重及肺重均较对照组减少（P0.05）。地塞米松干预组与宫内感染相比新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d体重及肺重均增加（P0.05）。 4、宫内感染组新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d肺组织中NF-κBp65、TNF-α表达较对照组明显增加(P0.01)，两者上升呈正相关性（r=0.975， P0.01）。 5、地塞米松干预组与宫内感染相比：新生大鼠生后第1d、3d、7d、14d肺组织中NF-κBp65、TNF-α表达明显下降(P0.01)，两者下降呈正相关性（r=0.967，P0.01）。 结论： 1、腹腔内注射LPS导致母鼠子宫胎盘内血管充血、水肿，大量中性粒细胞浸润，建立孕鼠宫内感染模型。宫内感染后，新生大鼠体重、肺重降低，新生大鼠肺泡膈减少，增厚，肺泡数目减少，肺泡结构简单化，RAC明显减少，提示宫内感染使肺泡发育受损，导致了类似支气管肺发育不良病理变化。 2、宫内感染后，新生大鼠肺组织中NF-κBp65及TNF-α表达明显增加，提示细胞因子反应在宫内感染致新生大鼠支气管肺发育不良中起到重要作用。 3、宫内感染及地塞米松干预后，新生大鼠肺组织中NF-κBp65及TNF-α的变化趋势基本一致，呈明显的正相关性，提示NF-κBp65与TNF-α在宫内感染致新大鼠支气管肺发育不良中具有协同作用。 4、宫内感染早期应用地塞米松干预后，新生大鼠肺组织中NF-κBp65及TNF-α表达下降，肺组织病理变化减轻，辐射状肺泡计数（RAC）增加，体重、肺重增加，地塞米松早期干预对宫内感染引起的新生大鼠支气管肺发育不良起到一定的保护作用。
【关键词】：宫内感染 支气管肺发育不良 地塞米松 NF-κBp65 TNF-α
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-19
• 2.1 实验动物13
• 2.2 实验仪器设备13-14
• 2.3 主要实验试剂14
• 2.3.1 动物模型实验试剂14
• 2.3.2 免疫组化检测试剂14
• 2.4 主要试剂配制14-15
• 2.5 孕鼠模型制作15
• 2.6 宫内感染模型的建立及实验分组15-16
• 2.7 标本采集16
• 2.8 指标测定和方法16-18
• 2.8.1 新生鼠的体重、肺重、肺重/体重的检测16
• 2.8.2 孕鼠子宫胎盘及新生大鼠肺组织的病理检查16-17
• 2.8.3 辐射状肺泡计数(RAC)17
• 2.8.4 S-P 免疫组化染色检测肺组织中 NF-κBp65 及 TNF-α蛋白表达17-18
• 2.9 统计学方法18-19
• 第3章 实验结果19-28
• 3.1 孕鼠分娩及新生鼠情况19
• 3.2 各组实验新生大鼠体重，肺重、肺指数（肺重／体重）的变化19-21
• 3.3 各组孕鼠子宫及胎盘 HE 染色结果21-22
• 3.4 宫内感染后新生鼠肺组织病理变化22
• 3.5 各组新生大鼠辐射状肺泡计数 RAC 的变化22-23
• 3.6 各组新生大鼠肺组织中 NF-κBP65 的变化23-25
• 3.7 各组新生大鼠肺组织中 TNF-α的变化25-26
• 3.8 NF-κBp65 与 TNF-α之间进行相关性分析26-28
• 第4章 讨论28-34
• 4.1 宫内感染致新生大鼠 BPD 动物模型的制备28-29
• 4.2 宫内感染与支气管肺发育不良29-30
• 4.3 宫内感染致新生鼠 BPD 肺组织中 NF-κBp65 及 TNF-α的变化30-32
• 4.4 地塞米松对宫内感染致 BPD 的保护作用32-34
• 第5章 结论34-35
• 第6章 本研究展望35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-40
• 附图40-43
• 攻读学位期间的研究成果43-44
• 综述44-49
• 参考文献48-49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 高晓燕;肖昕;;宫内感染与胎儿肺发育异常关系的研究进展[J];临床儿科杂志;2010年09期

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本文编号：1113395