内毒素耐受幼鼠肝脏Myd88及Tollip蛋白表达变化的研究

发布时间：2017-11-09 10:30

  本文关键词：内毒素耐受幼鼠肝脏Myd88及Tollip蛋白表达变化的研究

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【摘要】：目的：建立内毒素耐受幼鼠模型，研究内毒素耐受幼鼠肝脏组织TLR4（Toll样受体4）/Myd88通路上正性因子髓样分化蛋白88(Myeloid differentiation factor88，Myd88)及负性因子Toll反应蛋白（Toll interacting protein，Tollip）的表达情况。方法：1、实验分组：将96只ICR幼鼠（日龄40±2天）随机分为3组，每组32只幼鼠。第一组为实验组(预先刺激组)，第二组为实验对照组（非预先刺激组），第三组为空白对照组。2、建立内毒素耐受模型：（1）采用腹腔注入脂多糖的方法，对实验组幼鼠经腹腔注入0.5mg/kg脂多糖，对实验对照组及空白对照组幼鼠经腹腔注入等容量的生理盐水。（2）24小时后对实验组及实验对照组幼鼠经腹腔注入5mg/kg脂多糖，对空白对照组幼鼠经腹腔注入等容量的生理盐水。3、指标检测：（1）分别在第二次注射0h(第二次注射前)，3h，8h，，24h每组随机选取幼鼠8只，采用眼球摘除法取幼鼠外周血，分离血清，采用酶联免疫分析法检测各组各时间点幼鼠血清晚期细胞因子高迁移率组蛋白B-1（High mobility group protein B-1，HMGB-1）的表达情况。（2）取血后在无菌操作下取幼鼠肝脏组织，并放在4%多聚甲醛固定液中保存，石蜡固定切片，采用免疫组织化学法检测各组各时间点幼鼠肝脏Myd88及Tollip蛋白的表达情况，同时观察病理改变。结果：1、幼鼠行为变化：小剂量及大剂量脂多糖刺激后幼鼠均出现少吃、少喝、少动、嗜睡及毛发散乱等表现，大剂量脂多糖刺激后上诉症状尤为明显，生理盐水刺激后幼鼠无明显变化。2、幼鼠血清HMGB-1表达情况：（1）对第二次注射0h、3h幼鼠血清HMGB-1表达量进行组间比较，各组间差异无统计学意义（P0.05，P0h=0.686、P3h=0.356)。（2）对第二次注射8h、24h幼鼠血清HMGB-1表达量进行组间比较，实验组幼鼠血清HMGB-1表达量明显低于实验对照组，组间差异有统计学意义（P0.05），提示内毒素耐受模型建立成功；实验组及实验对照组幼鼠血清HMGB-1表达量均明显高于空白对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）。（3）在实验组及实验对照组中幼鼠血清HMGB-1出现表达的时间在第二次注射3h--8h时刻之间，在24h时刻时表达并未恢复至原有基础水平。3、实验组幼鼠肝脏组织病理损伤明显轻于实验对照组，进一步提示内毒素耐受模型建立成功。4、幼鼠肝脏组织Myd88表达情况：（1）对第二次注射前0h幼鼠肝脏组织Myd88表达量进行组间比较，各组间差异无统计学意义（P0.05，P0h=0.956）。（2）对第二次注射3h、8h幼鼠肝脏组织Myd88表达量进行组间比较，实验对照组幼鼠肝脏组织Myd88表达量高于实验组及空白对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）；实验组幼鼠肝脏组织Myd88表达量高于空白对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）。（3）对第二次注射24h幼鼠肝脏组织Myd88表达量进行组间比较，实验对照组幼鼠肝脏组织Myd88表达量高于实验组及空白对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）；实验组幼鼠肝脏组织Myd88表达量与空白对照组比较，组间差异无统计学意义（P0.05，P24h=0.08)。（4）在实验对照组中幼鼠肝脏组织Myd88的表达在第二次注射3h时刻已经出现，8h时刻最高，24h时刻仍然存在。5、幼鼠肝脏组织Tollip表达情况：（1）对第二次注射0h幼鼠肝脏组织Tollip表达量进行组间比较，各组间差异无统计学意义（P0.05，P0h=0.98)。（2）对第二次注射3h、8h幼鼠肝脏组织Tollip表达量进行组间比较，实验组幼鼠肝脏组织Tollip表达量高于实验对照组及空白对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）；实验对照组幼鼠肝脏组织Tollip表达量高于空白对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）。（3）对第二次注射24h幼鼠肝脏组织Tollip表达量进行组间比较，实验组幼鼠肝脏组织Tollip表达量略低于实验对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）；实验组及实验对照组幼鼠肝脏组织Tollip表达量均明显高于空白对照组，组间差异有统计学意义（P0.05）。（4）在实验组及实验对照组中幼鼠肝脏组织Tollip的表达在第二次注射3h时刻已经出现，8h时刻最高，24h时刻仍然存在。6、在第二次脂多糖注射后的8h、24h时刻，Myd88与HMGB-1的表达水平呈正相关（r8h=0.912，P8h0.05；r24h=0.907，P24h0.05）；Tollip与HMGB-1的表达水平呈负相关（r8h=－0.950，P8h0.05；r24h=－0.829，P24h0.05）。7、在第二次脂多糖注射后的3h、8h、24h时刻，Myd88与Tollip的表达水平呈正相关（r3h=0.960，P3h0.05；r8h=0.844，P8h0.05；r24h=0.895，P24h0.05）。结论：1、采用经腹腔注入0.5mg/kg脂多糖，24小时后再次注入5mg/kg脂多糖的方法建立幼鼠内毒素耐受模型是可行的。2、内毒素耐受后血清晚期细胞因子HMGB-1表达减少，肝脏组织病理损伤减轻。3、TLR4/Myd88通路上正性因子Myd88表达降低，负性因子Tollip表达升高，可能是内毒素耐受的机制之一。
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R720.597

【参考文献】

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2 徐宁;于振海;王志强;曲洪林;孙毅;刘蛟;;Toll样受体4及其负性调控因子Tollip在结肠炎大鼠肠黏膜中的表达[J];第二军医大学学报;2012年01期

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本文编号：1161481