干扰素膜蛋白（IFITM）Tet-on系统稳定细胞系的建立及其抗CA16病毒的初步研究

发布时间：2017-11-11 16:12

  本文关键词：干扰素膜蛋白（IFITM）Tet-on系统稳定细胞系的建立及其抗CA16病毒的初步研究

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【摘要】：背景：手足口病是一种常见的儿童传染性疾病，该病以手、足和口腔粘膜疱疹或破溃后形成溃疡为主要临床症状，可引起少数患儿产生心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症，病情发展过快严重时会导致患儿死亡，，目前仍然没有有效的预防措施及治疗手段。IFITM是一种干扰素诱导产生的抗病毒蛋白，其对多种病毒均具有很好的抑制作用。因此，研究其对手足口病主要病毒CA16的抗病毒作用可为今后的预防及治疗提供理论依据。 方法：通过Tet-on调控系统，构建了受强力霉素诱导表达ifitm1/2/3基因的HeLa细胞系，并初步探索了其对柯萨奇病毒A16（CA16）的抑制作用。首先将调控质粒pTet-on转染进入HeLa细胞，通过G418筛选出阳性克隆细胞系，在此细胞系基础上共同转染反应质粒pTRE2-IFITM1/2/3和伴侣质粒pTK-Hyg，通过潮霉素筛选出单克隆细胞系，加入强力霉素后Western Blotting筛选出可诱导表达IFITM1/2/3蛋白的单克隆细胞系。使用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测强力霉素诱导表达的IFITM蛋白对不同感染复数(multiplicity of infection, MOI)的CA16的抑制作用。 结果：成功构建了受强力霉素诱导表达的IFITM细胞系，细胞感染不同MOI CA16病毒，Realtime PCR结果显示IFITM蛋白对CA16病毒具有很好的抑制作用，其中IFITM3的抑制效果最为明显。 结论：Tet调控ifitm1/2/3基因表达HeLa细胞系的成功建立，为进一步研究ifitm基因的功能及其抗病毒机理提供了一个理想的细胞模型，同时也为手足口病的今后深入研究提供理论依据。
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R725.1

【参考文献】

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1 ;Replication Kinetics of Coxsackievirus A16 in Human Rhabdomyosarcoma Cells[J];Virologica Sinica;2012年04期

本文编号：1172119