高氧暴露下A549细胞内质网应激相关因子的表达及胰岛素样生长因子-I干预影响

发布时间：2017-11-17 06:02

本文关键词：高氧暴露下A549细胞内质网应激相关因子的表达及胰岛素样生长因子-I干预影响

【摘要】：目的:暴露在高氧条件下蝴市组织会发生损伤,在这个过程中内质网应激发挥了重要的作用,本次实验研究IGF-Ⅰ对暴露在高氧条件下的A549细胞中内质网画钳目关因子CHOP、 caspase-3表达以及细胞形态变化的影响。方法:将复苏、传了培养的A549细胞株分为五组:Ⅰ组:正常空气组,Ⅱ组:高氰暴露组,Ⅲ现:高氧．+IGF-Ⅰ (1ng/ml)剂量组,Ⅳ组:高氧+IGF-Ⅰ (10ng/ml)剂量组,Ⅴ组:高氧+[GF-Ⅰ(100ng/ml)剂量组。习射新中于培养皿中的各组A549细胞,放入COz恒温细胞培养箱内进行培养,待次日通过倒置显微镜观察各组细胞动态生长状况,当细胞汇合至50％左右时,加入不同药物浓度IGF-Ⅰ渊予下预。其中,Ⅰ组(正常空气组):将含有A549细胞的培养皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培养液,并放入5%CO2、37℃细胞培养箱内培养；Ⅱ组(高氧暴露组):将含有A549细胞的培养皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培养液,为重入3L/min含5%CO2、5%N2和90%氧气的高氧混合气体lh后,为维持高氧环境持续给予低流量的上述混合气体,并置于37℃培养箱内培养24h；药物干预组:将经不同剂量IGF-Ⅰ处理后峋Ⅲ,Ⅳ、Ⅴ组细胞与高氧组一样的方法提供的高氧环境,置于37℃培养箱内培养24h；通过倒置显微镜观察细胞凋亡、形态变化清况；采用MTT测定正常空气组、高氧暴露组和不同浓度IGF-Ⅰ干预组间的细胞存活率;采用JDAPI3走光染色观察各组间的细胞核凋亡情况;应用、Western-blot险测内质网应激相关因子CHOP、Caspase-3的表达清况。结果:倒置显微镜观察细胞形态学显示高氧暴露Ⅱ组与正常Ⅰ组市目比存活的细胞明显变少,细胞发生收缩变小、变圆,与周围细胞分离等典型的凋亡现象；经不同剂IGF-Ⅰ处理后,细胞也出现了凋亡现象,但存活的细月断目对较多,以高氧+IGF-Ⅰ (100ng/ml)组最显著。细胞存活率测定显示各组间细胞的存活率有明显不同,经高氧处理后的细胞存活率低,而经不同剂量IGF-Ⅰ干预后的A549细胞的存活率呈增高趋势,其中高氧+IGF-Ⅰ (100ng/ml)组细胞存活率最高。DAPI萤光染色结果表明高氧处理后经荧光标记出的细胞核较多,经不同剂量[GF-Ⅰ处理后被荧瑙示细胞核逐渐减少,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)组差异显著。Western-blot:结果显示CHOP、Caspase-3凋亡因子的表达在高滓兀组,中显著增加,经不同剂量IGF-Ⅰ干预后,CHOP的表达均有减少,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)组差异最明显(P0.01);Caspase-3的表达均有减少趋势,其中高氧+IGF-Ⅰ(100ng/ml)组差异最明显(P0.01)。结论:1、IGF-Ⅰ对暴露在高浓度的氧气环境下的A549细胞具有保护作用； 2、IGF-Ⅰ与抑制A549细月冬在高浓度的氧气环境下凋亡的作用；不同剂量浓度IGF-Ⅰ在抑制凋亡时可能具有双向作用,IGF-Ⅰ在100ng/ml剂以量时抑制凋亡作用最强； 3、暴露在高浓度氧气环境下的A549细胞可发生内质网应激现象,其凋亡因子CHOP、Caspase-3:表达增高； 4、IGF-Ⅰ能够对高氧暴露条件下的A549细胞中的凋亡因子CHOP和Caspase-3表达降低,起到了抗凋亡的作用。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.1

【参考文献】

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