柯萨奇病毒A16 VP4蛋白的克隆表达及其抗体中和效应的初步分析

发布时间：2017-11-22 02:11

  本文关键词：柯萨奇病毒A16 VP4蛋白的克隆表达及其抗体中和效应的初步分析

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【摘要】：柯萨奇A16型病毒(Coxsackie virus A16, CA16)感染是引起手足口病(hand foot and mouth disease, HFMD)最主要的致病原之一。手足口病是五岁以下儿童感染该病毒后的常见传染病,一旦感染则常常会导致严重的中枢神经系统并发症,死亡率极高。然而,据报道到目前为止,针对同为手足口病另一重要致病原EV71病毒的灭活疫苗已经完成了三期临床试验,而EV71灭活疫苗的实验研究表明对CAl6病毒引起的感染交叉保护力低,为了扩大对手足口病的保护效率,研发CA16的安全有效的疫苗势在必行。CA16的结构蛋白VP1-3暴露在病毒的外表面,构成病毒的衣壳,是抗原决定簇的存在部位,带有中和抗原活性和特异性抗原位点,是非常重要的抗原表位研究对象；而VP4包埋在衣壳内部,与核心紧密相连,同时序列也较为保守,在病毒VP1蛋白与受体结合后,衣壳松动,VP4蛋白即脱落,病毒基因组完成脱壳穿入过程,在现有研究成果的基础上,如果能加深对VP4蛋白的研究,或许能够找到更好的亚单位疫苗研制途径。 本研究选取CA16病毒G20株作为研究对象,构建了谷胱甘肽-S-转移酶标记的VP4融合蛋白(Gst-VP4)的表达基因,并将其转入原核表达系统进行诱导表达,表达后的菌液经超声,离心取上清,采用谷胱甘肽琼脂糖(Glutathione Sepharose4B)亲和吸附,纯化后获得纯度较高的目的蛋白。 在动物免疫效果评价研究中,以家兔作为实验动物,以0,、14、28、36天的免疫时间点,采取初次免疫之后进行三次加强免疫的免疫程序免疫3-4月龄家兔；随后western blot实验证明有病毒结构蛋白VP4的成功表达以及实验动物体内产生特异性免疫反应并产生相应特异性抗体。 体外抗体中和实验中,采用适用于病毒疫苗研制的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)体外培养与血清中的特异性抗体进行中和反应检测,,尤其体外中和反应初步证实,在免疫血清稀释度1：1-1：8时,CA16G20株在Vero细胞中的增殖受到了明显的抑制。结果初步证明表达蛋白能诱发机体产生一定的保护性中和抗体
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R725.1

【参考文献】

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本文编号：1213087