MiR-19b过表达对P19细胞分化的影响

发布时间：2017-11-23 15:18

  本文关键词：MiR-19b过表达对P19细胞分化的影响

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【摘要】：目的：脊椎动物的心脏是胚胎发育过程中最早形成并行使功能的器官，主要来源于中胚层间充质细胞，其发生需经过多细胞系特化、管状结构形成、最后精确组装成成熟4个心腔结构等发育过程，需要系列重要的形态发生事件，包括细胞决定、细胞迁移和细胞分化等，这些过程出现的时空顺序暗示了种复杂的基因调控模式以保证胚胎心脏的协调发育。近年来，心脏发育的研究已经取得了较大的进展，然而心脏疾病发生的分子机制依然不很明确，更多的分子机制研究还需要进步的开展。microRNA的出现，为我们带来了新的研究思路。microRNA（miRNA）是类小分子非编码单链RNA，，长约22个核苷酸，通过与靶mRNA3'非翻译区（3'UTR）互补配对，抑制翻译，从而在转录后水平对生物体内基因时序性表达起到精细调节作用。近年来，大量研究表明microRNA在心脏发育、心肌肥厚、心力衰竭、心律失常以及高血压等疾病的发生发展过程中起着重要作用,使microRNA成为国际心血管研究领域的热点。P19细胞在特定的条件下能够向心肌细胞分化，是研究心脏发育、基因调控的有用工具。miR-19b是通过芯片筛选出与心脏发育高度相关的种miRNA，本研究旨在探讨miR-19b过表达对P19细胞分化的影响。 方法：脂质体2000转染miR-19b过表达质粒与空载质粒进入P19细胞，通过杀稻瘟菌素筛选出稳定株；通过DMSO将稳定表达miR-19b的细胞株进行诱导分化，应用普通倒置显微镜观察细胞跳动情况；实时定量聚合酶链反应检测miR-19b表达水平以及分化基因（cTnT、ANP、GATA4）的表达水平。 结果：转染miR-19b过表达质粒与空载质粒进入P19细胞，实时荧光定量PCR检测证实miR-19b过表达载体与细胞系成功建立（P0.05）；在P19细胞分化过程中，miR-19b过表达组心肌细胞分化数量增多，且miR-19b过表达组心肌标志物均显著高于对照组（P均0.05）。miR-19b显著促进P19细胞向心肌细胞分化。 结论：miR-19b过表达对P19细胞分化影响的研究，发现心肌细胞分化数量、标志基因表达均明显高于对照组， miR-19b可以显著促进P19细胞向心肌细胞的分化，为以后其用于心脏发育的进步研究奠定基础。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R725.4

【参考文献】

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本文编号：1218919