Piwil2重编程儿童成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究

发布时间：2017-12-07 21:27

  本文关键词：Piwil2重编程儿童成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究

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【摘要】：目的观察精原干细胞自我更新基因Piwil2重编程儿童成纤维细胞的细胞形态及功能特征变化，建立Piwil2调控肿瘤干细胞发生过程的细胞实验模型。 方法将携带Piwil2-GFP标记的和空载的目的基因GFP标记的慢病毒载体分别感染原代培养的小儿包皮成纤维细胞，，筛选建立稳定表达Piwil2-GFP和GFP成纤维细胞系，观察细胞形态变化及肿瘤球形成过程。体外分析细胞染色体核型，RT-PCR鉴定重编程后细胞的干细胞标记物OCT-4,Sox2,Nanog,c-Myc,Klf-4及三胚层分化的相关标志物Nestin,Tubb3,Brabury,CATA-4等。裸鼠体内成瘤实验，组织学观察肿瘤形态，RT-PCR，免疫组织化学进一步分析分析干细胞及各胚层指标在裸鼠肿瘤中的表达。 结果 ①荧光显微镜观察到转染Piwil2-GFP和空载GFP成纤维细胞转染后，两组细胞均稳定表达绿色荧光。48h流式细胞仪检测转染效率为51.2%和45.7%，继续筛选培养后稳定表达率约70%，且Piwil2-GFPFB细胞体积变小，形态逐渐由长梭型变为圆形并出现集落样生长，集落可形成圆形克隆。 ②RT-PCR检测Piwil2-GFP FB细胞过表达Piwil2,表达干细胞多能基因Oct-4，Sox2，Nanog，Klf-4，c-Myc及三胚层分化相关基因。 ③染色体核型结果显示Piwil2-GFP FB细胞染色体分别为67-70条的超二倍体结构,可见多倍体染色体。 ④“肿瘤球”样克隆裸鼠体内移植2周时100%形成肿瘤,肿瘤组织学及免疫组化鉴定为来表达多种外胚层,中胚层及内胚层肿瘤标志物的恶性肿瘤,RT-PCR显示细胞及裸鼠肿瘤表达干细胞多能基因Oct-4，Nanog，Sox2以及三胚层特征标记物。 结论 ①Piwil2基因成功转染儿童成纤维细胞且细胞形态学发生改变，形成肿瘤球样集落。 ②Piwil2重编程后的成纤维细胞具有干细胞和多潜能分化特征，致瘤性及肿瘤细胞异质性。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R730.2

【参考文献】

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1 刘爽;段恩奎;;诱导产生多能性干细胞(iPS细胞)的研究进展[J];科学通报;2008年04期

本文编号：1263904