抑制KGFR表达对高氧暴露下A549细胞功能影响的研究

发布时间：2017-12-14 22:32

  本文关键词：抑制KGFR表达对高氧暴露下A549细胞功能影响的研究

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【摘要】：第一部分筛选KGFR沉默序列及对KGFR沉默A549细胞在高氧暴露下功能的初步研究 【目的】筛选有效的KGFR沉默序列，并研究高氧暴露下KGFR沉默的A549细胞的变化。 【方法】体外传代培养A549细胞，转染si-KGFR序列及si-NT序列，48h后收集细胞总RNA及总蛋白，，使用实时荧光定量PCR法检测KGFR mRNA的表达；用Western blot法检测KGFR蛋白表达的水平。对有效序列细胞通以950ml/L高氧，对照组转染置于同一室内空气中，观察两组细胞形态变化，用MTT法检测细胞活性的变化。 【结果】①序列特异性si-KGFR可抑制KGFR的表达，si-KGFR-001、si-KGFR-002、si-KGFR-0033组KGFR mRNA表达均受到抑制，si-KGFR-002组抑制效率最高。②与常氧对照组相比，si-KGFR-002转染细胞对高氧的耐受性降低，细胞形态不良，细胞活力降低(p0.005)。 【结论】KGFR沉默下的A549细胞对高氧耐受性降低，表现为细胞形态不良与细胞活性降低。 第二部分高氧暴露下抑制KGFR表达对A549细胞的抗氧化功能的研究 【目的】研究抑制A549细胞KGFR表达后对高氧暴露A549细胞抗氧化性的影响，以及外源性给予α-硫辛酸（LA），角化上皮生长因子（KGF）后对细胞的影响。 【方法】体外传代培养人肺腺癌A549细胞，随机分为四组：Ⅰ单纯高氧组；Ⅱ高氧+si-KGFR组；Ⅲ高氧+si-KGFR+LA组；Ⅳ高氧+si-KGFR+KGF组。各组通以950ml/L氧气，分别于培养24h、48h、72h后收集细胞，Western blot法检测各组KGFR蛋白表达的水平，采用流式细胞术检测各组A549细胞内活性氧水平及细胞凋亡水平；WST法检测细胞内锰型超氧化物歧化酶活性。 【结果】与高氧对照组相比，①KGFR沉默细胞胞内ROS水平较单纯高氧细胞内ROS水平高(p0.005)。②外源性LA、KGF可以减轻KGFR沉默细胞内ROS的产生(p0.05)。③高氧暴露所致的A549细胞死亡以早期凋亡为主，而高氧暴露对KGFR沉默细胞的致死效应更为显著(p0.005)。④外源性LA、KGF可以部分减轻高氧暴露对KGFR沉默细胞的致死效应(p0.005)。⑤高氧暴露使KGFR沉默细胞锰型超氧化物歧化酶活性降低，但各组间酶活性变化无统计学意义。⑥外源性LA、KGF可以提高高氧暴露下KGFR沉默细胞KGFR的表达(p0.05)。 【结论】抑制KGFR表达可高氧暴露下A549细胞内ROS水平升高，细胞凋亡数量增加；外源性给予LA、KGF可部分减轻KGFR抑制所致效应。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.1

【参考文献】

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1 常立文;;新生儿支气管肺发育不良的诊治[J];中国实用儿科杂志;2007年04期

本文编号：1289616