利用原位杂交技术研究H1N1流感病毒对心脏发育基因的影响

发布时间：2017-12-22 08:24

  本文关键词：利用原位杂交技术研究H1N1流感病毒对心脏发育基因的影响　出处：《湖南师范大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：先天性心脏病是一类严重威胁人类健康的疾病,遗传因素和环境因素是导致先天性心脏病的主要原因。在过去的几十年里,人们对导致先天性心脏病的研究取得了极大的进展,但对先天性心脏病的致病机制还是了解不多,尤其是环境因子影响心脏发育更是知之甚少。已有研究证明怀孕早期宫内病毒感染是最重要的环境因子之一。而临床流行病学调研表明有15种病毒的早期宫内感染可能与先天性心脏病的发生有关,但尚未有实验证明两者之间的关系。因此研究流感病毒对心脏发育相关基因的影响具有重要的意义。本课题以SPF级纯种KM小鼠为实验动物,通过建立稳定感染的H1N1流感病毒小鼠模型,以形态观察和原位杂交为主要手段,并以BMP信号途径为研究对象,从基因表达水平验证分析了BMP信号途径成员及部分心脏标志基因的表达变化。本论文获得主要研究结果如下:1、根据小鼠胚胎心脏的发育时间,在怀孕第7.5天进行攻毒,构建了H1N1流感病毒感染小鼠模型。对病毒感染怀孕小鼠胚胎及其对照进行了形态学观察研究,发现病毒感染组胚胎发育延缓,心脏发育异常。2、原位杂交检测BMP信号通路相关基因,发现在病毒感染胚胎中BMP4/5/7和BAMBI在早期心脏中表达都下调,说明了流感病毒影响了BMP信号通路。3、原位杂交检测心脏发育核心调控因子Nkx2.5在胚胎9.5、10.5天的表达,发现病毒感染胚胎在这两个时期表达明显减少,说明流感病毒影响了心脏发育。4、原位杂交检测第二心域标志因子Isl1和Fgf10的表达,发现Isl1在10.5和11.5天的病毒感染胚胎的右心室和流出道表达减少,Fgf10亦在10.5天的病毒感染胚胎的右心室和流出道下调,说明流感病毒能影响第二心域发育。5、进一步对腔室特化因子MLC2a和ehand的表达进行检测,发现MCL2a在9.5天的病毒感染胚胎表达减少,ehand在10.5、11.5天的病毒感染胚胎的左心室区域显著下调,这表明流感病毒也影响了心脏的腔室建成。综上所述,这些结果初步表明在早期心脏发育中流感病毒影响BMP信号及心脏发育的重要因子Nkx2.5、Isl1、Fgf10、MLC2a和ehand的表达。
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.4

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本文编号：1319090