盐酸氨溴索对宫内感染所致新生鼠支气管肺发育不良中ROS、NF-κBp65、TGF-β1表达的影响

发布时间：2018-01-04 15:10

  本文关键词：盐酸氨溴索对宫内感染所致新生鼠支气管肺发育不良中ROS、NF-κBp65、TGF-β1表达的影响　出处：《南昌大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的： 1.参考BELL[1]所建立的宫内感染模型，观察孕鼠宫内感染后所产新生大鼠的肺组织病理变化情况。 2.研究宫内感染致新生大鼠支气管肺发育不良（BPD）肺组织中ROS、NF-κBp65以及TGF-β1的表达，探讨三者在宫内感染致新生大鼠BPD中的作用。 3.研究盐酸氨溴索（AMB）对宫内感染致新生大鼠BPD中ROS、NF-κBp65以及TGF-β1表达的影响，并初步探讨其可能的作用机制，为AMB成为早期防治BPD的药物提供实验依据。 方法： 1.实验分组：将30只孕第15d的大鼠随机分为以下3组（每组n=10）：生理盐水对照组（NS组）、脂多糖组（LPS组）和盐酸氨溴索干预组（AMB组）。 2.模型制作及药物干预：参照Bell[1]等人的方法，通过给孕鼠腹腔内注射脂多糖（lip polysaccharide，LPS）造成孕鼠宫内感染模型。AMB组于孕15、16d连续2天腹腔内注射脂多糖LPS200μg/kg，，并在注射LPS后1h、孕17、18d连续3天腹腔内注射盐酸氨溴索（ambroxol，AMB）100mg/kg；LPS组于孕15、16d连续2天腹腔内注射LPS200μg/kg，并在注射LPS后1h、孕17、18d连续3天腹腔内注射与AMB等容积的生理盐水；NS组在相同的时间点腹腔注射等容积的生理盐水。 3.标本的采集：造模完成后分别从三组中随机取出1只孕鼠处死，取出胎盘、子宫并置于4%中性甲醛中固定，用于HE染色。足月新生大鼠娩出后，分别于生后4个时间点(1d、3d、7d、14d)称重后断头处死，迅速取出肺组织，使用生理盐水洗净，置于滤纸吸干肺组织表面水分后称重，然后将部分肺组织置于液氮中速冻，用以测定肺组织中ROS含量；剩余部分肺组织进行常规脱水、石蜡包埋，用于HE和免疫组化染色(每组每个时间点8只)。 4.观测指标：观察各组孕鼠注药后的一般情况，是否有死亡及流产的现象；通过HE染色观察各组孕鼠胎盘及子宫的病理变化情况；测量新生大鼠的肺重、体重，肺指数(肺重/体重)；HE染色观察肺组织病理形态学改变，并显微镜下计算生后第3d、7d、14d辐射状肺泡计数（radial alveolar count，RAC）；Elisa法测定肺组织中活性氧（ROS）的表达，免疫组织化学染色法测定肺组织中核因子-κBp65（NF-κBp65）以及转化生长因子-β1（TGF-β1）蛋白的表达。 结果： 1.孕鼠一般情况及分娩情况：三组孕鼠注药后均进食、活动正常，皮毛颜色未见明显变化，LPS组有1例孕鼠发生死亡、1例孕鼠出现阴道流血，NS组及AMB组孕鼠无死亡及流产发生。NS组孕鼠共获得72（72/74）只新生大鼠，LPS组共获得61（61/67）只新生大鼠，AMB组共获得62（62/65）只新生大鼠。 2.各组肺重和体重的变化：新生大鼠生后第1d、3d、7d：LPS组与NS组比较肺重及体重均减小（P0.05）；AMB组与LPS组比较肺重及体重均增加（P0.05），与NS组比较肺重及体重仍有所减少，但无统计学意义(P0.05)。新生大鼠生后第14d：各组间肺重、体重比较差异均无统计学意义(P0.05)。 3.胎盘及子宫的病理形态改变：LPS组孕鼠胎盘及子宫壁内血管充血、水肿，可见大量的中性粒细胞浸润；AMB组胎盘及子宫内充血、水肿及炎性浸润均较LPS组明显减轻；NS组胎盘及子宫内未见明显炎症反应。 4.肺组织的病理形态改变：LPS组新生大鼠生后第1d肺组织内囊泡样结构少于NS组，AMB组与LPS组比较囊泡数有所增加，但较NS组仍少；生后第7d肺组织中，LPS组可见肺泡数及肺泡膈均少于NS组，肺泡结构简单化；生后14d，LPS组肺泡数目较NS组明显减少，肺泡膈厚度却明显增加，AMB组肺组织中出现较LPS组大致类似的病理改变，但程度减轻。 5.新生大鼠RAC的变化：生后第3d的三组肺组织RAC之间比较无统计学意义(P0.05)。LPS组新生大鼠生后第7d、14dRAC较NS组减少（P0.05），AMB组新生大鼠生后第7d、14dRAC较LPS组增加（P0.05）。 6.LPS组新生大鼠生后第1d、3d、7d肺组织中ROS、NF-κBp65、TGF-β1表达明显高于NS组(P0.01)，生后14d三组间比较差异无统计学意义(P0.05)；ROS、NF-κBp65、TGF-β1三者之间两两比较均成正相关。 7.AMB组新生大鼠生后第1d、3d、7d肺组织中ROS、NF-κBp65、TGF-β1表达较LPS组明显下降（P0.01）。 结论： 1.通过腹腔内注射LPS建立的宫内感染孕鼠模型导致新生大鼠肺重和体重的降低，肺组织病理可见肺泡数目减少、肺泡膈减少及增厚等表现，提示宫内感染可导致BPD的发生。 2.宫内感染后新生大鼠肺组织内ROS、NF-κBp65及TGF-β1的表达均增加，提示宫内感染致新生大鼠BPD的发生发展与氧化应激反应、NF-κBp65及TGF-β1的上升有关。 3.宫内感染后ROS、NF-κBp65及TGF-β1两两比较均呈正相关，提示宫内感染后ROS、NF-κBp65及TGF-β1可能共同促进新生大鼠BPD的发生与发展。 4.AMB可通过抑制ROS的产生，降低NF-κBp65的转录活性，并最终减少TGF-β1的表达，从而发挥对宫内感染致新生大鼠支气管肺发育不良的保护作用。
[Abstract]:Objective:
1. the intrauterine infection model established by BELL[1] was used to observe the pathological changes of the lung tissue of the newborn rats after intrauterine infection.
2., we studied the expression of ROS, NF- Bp65 and TGF- beta 1 in the lung tissues of neonatal rats with intrauterine infection, and explored the role of the three in the BPD induced by intrauterine infection in BPD rats.
3., we studied the effect of ambroxol (AMB) on the expression of ROS, NF- Bp65 and TGF- beta 1 in BPD of neonatal rats, and explored the possible mechanism of AMB, so as to provide experimental evidence for AMB to become an early drug against BPD.
Method锛

本文编号：1378897