Lowe综合征八例临床及基因分析及CLCN5突变基因转染细胞实验
发布时间：2018-04-14 16:03
本文选题：Lowe综合征 + OCRL ； 参考：《大连医科大学》2017年硕士论文
【摘要】：第一部分Lowe综合征八例临床及基因分析目的分析和总结我院就诊的8例符合Lowe综合征临床诊断的患儿的临床表现及基因型特征,旨在提高对该疾病的认识。方法选择我院2011年11月至2016年6月份收治的临床诊断为Lowe综合征的8例患儿,回顾性总结、分析这些患儿的临床表现、实验室检查结果以及基因检测结果。结果该8例患儿均为男孩,均以先天性白内障为首发症状,但至发现尿检异常及确诊为Lowe综合征的时间间隔较长,为1~44月,平均(16.5±17.1)月。8例患儿除了眼部病变外,均合并有肌张力减退、运动发育迟缓、小分子蛋白尿和高钙尿的表现,都伴有生长发育落后的症状;除了上述这些表现外,2/8(2例)的患儿合并严重的先天性青光眼,7/8(7例)合并智力下降,2/8(2例)合并行为障碍表现,2/8(2例)合并惊厥表现,6/8(6例)头颅MRI结果显示异常,6/8(6例)合并氨基酸尿,2/8(2例)合并肾小管酸中毒表现,1/8(1例)合并低钾血症,2/8(2例)合并佝偻病表现,5/8(5例)合并骨质缺乏,2/8(2例)合并面部畸形。其中7例通过外显子捕获-第二代测序法行基因测序,检测结果发现6例患儿存在OCRL基因突变,分别为R361G、L423W、Q388P、N373I、R695X及I366N,包括5个错义突变及1个无义突变;1例患儿未检出OCRL基因突变,但却发现存在SLC4A1基因c.16-15GA位点的杂合突变;除R695X外,均为之前未报到过的新突变。结论1.Lowe综合征患儿表现为以眼睛、神经系统、肾脏异常为主的多系统的病变。2.患儿多以先天性白内障等眼部病变为首发表现,但至发现尿检异常并确诊Lowe综合征的间隔时间较长,因而提早确诊时间对患儿的诊治方面可能有重要的意义。3.部分临床表现为Lowe综合征的患儿未检出合并OCRL基因突变,故推测OCRL可能不是导致Lowe综合征的唯一致病基因。第二部分CLCN5突变基因转染293细胞实验目的我院近年来收治了多例Dent病患儿,掌握了Dent病的诊治方法,现已知该病为一种伴X隐性遗传病,多数患儿由CLCN5基因突变致病,但目前发病机制仍不十分明确。在诊治过程中我们也发现2例CLCN5基因突变的Dent病患儿的表型及基因突变各不相同,1例尿蛋白水平相对不高,另1例则表现为大量蛋白尿,基因检测结果分别为CLCN5基因的IVS3-2AG及L594fsX595突变。为进一步研究Dent病的发病机制,我们设计了一个实验来探索这两个突变基因所导致的突变效应,并在前期工作中合成了含这两个突变基因的质粒。方法利用SYBR染料法将含有2个CLCN5突变基因IVS3-2AG和L594fsX595及CLCN5野生型基因的质粒转染至293细胞中,取这些细胞中目的基因Megalin、Cubilin、NHE3、V-H+-ATPase的mRNA,反转录为DNA,通过QPCR技术扩增并检测这4个目的基因的相对表达量。将含有2个突变基因的293细胞中上述4个目的基因的相对表达量分别与含CLCN5野生型基因的293细胞中的作对比,从而初步推断基因的突变效应。结果含有野生型CLCN5基因及IVS3-2AG、L594fsX595突变基因的质粒成功转染至293细胞中。含IVS3-2AG突变基因的293细胞中Megalin、Cubilin、NHE3、V-H+-ATPase基因的相对表达量与野生型相比无明显差别,差异无统计学意义(P0.05);而含L594fsX595突变基因的293细胞中Megalin和V-H+-ATPase基因的相对表达量减少,与野生型对比差异有统计学意义(P0.05),而Cubilin和V-H+-ATPase基因的相对表达量与野生型相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论1.野生型CLCN5及IVS3-2AG、L594fsX595突变CLCN5基因成功转染至293细胞中。2.L594fsX595突变导致Megalin、V-H+-ATPase的表达量减少,可能为引起小分子蛋白尿的原因之一。
[Abstract]:The first part of Lowe syndrome: analysis of eight cases clinical analysis and gene and summarize our hospital 8 patients with clinical diagnosis of Lowe syndrome with clinical manifestations and genotype characteristics, aims to enhance the understanding of the disease. Methods select 8 patients of clinical diagnosis in our hospital from November 2011 to 2016 June were treated for Lowe syndrome the retrospective analysis of clinical manifestations, these children, laboratory results and gene detection results. Results the 8 cases were boys, with congenital cataract is the first symptom, but to find abnormal urine and diagnosed as Lowe syndrome in a longer time interval, for 1~44 months, average (16.5. 17.1).8 cases in addition to eye disease, are associated with hypotonia, motor retardation, small molecule protein and urinary calcium, are associated with growth retardation symptoms; in addition to these tables 鐜板,2/8(2渚，
本文编号：1750021
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