促酰化蛋白对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

发布时间：2018-04-21 14:15

  本文选题：脂肪细胞 + 胰岛素抵抗　； 参考：《华中科技大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的 观察不同类型、不同浓度的游离脂肪酸对3T3-L1成熟脂肪细胞在胰岛素刺激状态和ASP刺激状态下胰岛素经典信号通路（IRS-1，PI3K）蛋白表达的影响，以及脂代谢关键酶（LPL,HSL,Perilipin,DGAT）基因水平及蛋白表达的影响，以探讨ASP对脂肪细胞糖脂代谢的调节作用。 方法 1、采用经典的激素“鸡尾酒”（10μg/ml胰岛素+0.5mmol/L1-甲基3-异丁基黄嘌呤+1.0μmol/L地塞米松）诱导方法，诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，显微镜下观察3T3-L1前脂肪细胞及脂肪细胞形态，油红O染色观察胞浆内脂滴聚集。 2、Western Blot方法检测ASP和INS刺激下脂肪细胞HSL,Perilipin,IRS-1,PI3K蛋白表达水平。 3、Real-time PCR方法定量检测ASP刺激下脂肪细胞LPL, HSL, Perilipin,DGAT基因表达水平。 结果 1、显微镜下观察3T3-L1前脂肪细胞呈成纤维细胞样的长梭形，胞浆中无脂滴；分化成熟后，细胞呈大圆形，胞浆内可见大量脂滴包绕胞核，呈“戒环”状。 2、INS和ASP作用于对照组（0mmol/L）和刺激组（1.0mmol/L）的游离脂肪酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪细胞，结果示：1.0mmol/L油酸和棕榈酸孵育过夜后，INS刺激和ASP刺激下显著增加成熟脂肪细胞HSL和Perilipin蛋白的表达。与对照组比（无FFA刺激），油酸组增加1.75倍（p0.01）INS刺激状态和76%（p0.05）ASP刺激状态成熟脂肪细胞HSL蛋白的表达。棕榈酸组增加85%（p0.01）INS刺激状态成熟脂肪细胞HSL蛋白的表达。油酸和棕榈酸还增加INS刺激状态1.27倍（p0.01）和96%（p0.05）脂肪细胞perilipin蛋白的表达，以及86%（p0.05）INS刺激状态下和76%（p0.05）ASP刺激状态下perilipin蛋白表达。 1.0mmol/L油酸和棕榈酸孵育过夜后，INS和ASP刺激下显著增加成熟脂肪细胞PI3K蛋白的表达。与对照组相比（无FFA刺激），油酸和棕榈酸组分别增加2.59倍（p0.01）和3.66倍（p0.01）INS刺激状态成熟脂肪细胞PI3K蛋白的表达，棕榈酸增加1.27倍（p0.01）ASP刺激状态下PI3K蛋白表达。 与此相对，INS和ASP刺激均未能显著增加成熟脂肪细胞IRS-1蛋白的表达。 而与INS刺激组相比，ASP组均未能显著增加成熟脂肪细胞PI3K蛋白、perilipin蛋白、HSL蛋白及perilipin蛋白的的表达（P＞0.05）。 3、ASP作用于不同浓度(0.125、0.5、1.0mmol/L)的游离脂肪酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪细胞，结果示：ASP可以从不同程度上增加脂代谢关键酶HSL、LPL、Perilipin和DGAT基因的表达。 与空白对照组相比，ASP刺激下，，0.5mmol/L与1.0mmol/L油酸组HSL基因表达显著升高5倍和3.26倍（p0.01），0.5mmol/L与1.0mmol/L棕榈酸组HSL基因表达显著升高1.98倍和1.87倍（p0.05）。 ASP刺激下，0.125mmol/L油酸孵育的3T3-L1成熟脂肪细胞LPL基因表达与空白对照组相比降低了41%（p0.05），0.5mmol/L与1.0mmol/L油酸孵育的3T3-L1成熟脂肪细胞LPL基因表达与空白对照组相比分别升高1.87倍和2.98倍（p0.01）。而对不同浓度棕榈酸孵育的3T3-L1成熟脂肪细胞LPL基因表达无明显影响（p＞0.05）。 ASP作用于0.5mmol/L和1.0mmol/L的油酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪细胞，其perilipin基因表达与空白对照组相比分别升高6.87倍和5.46倍（p0.01）。而仅对0.125mmol/L浓度的棕榈酸的分化成熟的3T3-L1脂肪细胞perilipin基因表达降低27%（p0.05），0.5mmol/L与1.0mmol/L棕榈酸组则无明显影响（p＞0.05）。 ASP作用下，0.5mmol/L与1.0mmol/L油酸组DGAT基因表达均有分别升高2.5倍和2倍（p0.01）。三种不同浓度（0.125、0.5、1.0mmol/L）棕榈酸孵育的3T3-L1成熟脂肪细胞DGAT基因表达与空白对照组相比分别升高3.81倍、4.63倍和2.53倍（p0.05）。 结论 在脂肪酸诱导的胰岛素抵抗状态下，ASP可增加脂代谢关键酶HSL、perilipin蛋白及经典胰岛素信号通路PI3K蛋白的表达。ASP可以从不同程度上增加糖脂代谢关键酶HSL、LPL、Perilipin和DGAT基因的表达，通过增加这些酶的表达，提高酶的敏感性，参与调节脂肪细胞糖脂代谢。
[Abstract]:Purpose

The effects of different types of free fatty acids with different concentrations on the expression of insulin classical signal pathway ( IRS - 1 , PI3 ) protein in 3T3 - L1 mature adipocytes were investigated . The effects of different concentrations of free fatty acids on the expression of insulin classical signal pathway ( IRS - 1 ) and protein expression in 3T3 - L1 mature adipocytes were investigated . The effects of ASP on the lipid metabolism of 3T3 - L1 adipocytes were investigated .

method

1 . The differentiation of 3T3 - L1 preadipocytes into mature adipocytes was induced by classical hormone " cocktail " ( 10 渭g / ml insulin + 0.5 mmol / L - methyl 3 - isobutylxanthine + 1.0 渭mol / L dexamethasone ) .

2 . Western Blot was used to detect the expression level of HSL , Periarthritis , IRS - 1 and PI3 protein in fat cells stimulated by ASP and INS .

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本文编号：1782783