滤泡辅助性T细胞促进IgAN患儿IgA抗体类别转换及Gd-IgAl生成

发布时间：2018-05-03 20:22

  本文选题：IgA肾病 + 滤泡辅助性T细胞　； 参考：《华中科技大学》2013年博士论文

【摘要】：第一部分 IgAN患儿外周血Tfh检测及mlgA, IL-21,TGF β1的表达 目的探讨滤泡T辅细胞(Tfh)及其细胞因子IL-21,TGF β1和mIgA,在IgAN患儿(含原发和继发性IgA肾病即紫癜性肾炎,IgAN)外周血中的表达情况。方法IgA肾病患儿根据用药情况分为初治未用药组、免疫抑制治疗组,20例初治未用药IgAN患儿,34例免疫抑制剂治疗IgAN患儿纳入研究,22例正常儿童作对照。用流式细胞术检测外周血中Tfh(CXCR5+CD4+)在CD4+T淋巴细胞中的比例,淋巴细胞膜表面mIgA在CD19+细胞中的表达水平,采用RT-PCR检测淋巴细胞IgA基因CHα1和CHα2表达水平,elisa检测血清Tfh细胞分泌因子IL-21和TGF β1的表达。结果(1)未用药组患儿外周血Tfh为(19.87%±1.00%),免疫抑制治疗组为(13.87%±0.83%),正常对照组为(10.28%±0.68%)。统计检验表明,三者间均数差异均有显著意义(P0.001)。(2)IgA肾病患儿CD19阳性淋巴细胞中mIgA表达(13.21±0.85)显著高于正常对照组(8.75±0.32), P0.0001。 IgA肾病患儿外周血淋巴细胞IgA基因CHα1和CHα2表达高于对照患儿.(3)IgA肾病患儿血清细胞因子IL-21为102.2±9.5(pg/ml),明显高于正常儿童74.38±2.6(pg/ml), P＜0.05. TGFβ1为80392±2274(pg/ml),显著高于正常儿童29384±1828(pg/ml), P＜0.05。结论初步发现在IgAN患儿外周血中Tfh和细胞分泌因子以及mIgA的表达显著增多,提示Tfh可能在该疾病IgA产生中起作用,免疫抑制治疗可以明显降低Tfh在CD4+T淋巴细胞中的比例。 第二部分 IgAN患儿Tfh促进B细胞IgA抗体类别转换 目的体外探讨IgAN患儿Tfh诱导B细胞IgA抗体类别转换的作用。方法磁珠分选初治未用药IgAN患儿及正常儿童外周血中的Tfh和初始B细胞(Naive B cells, NB)共培养,通过real-time RT-PCR检测共培养体系基因TGF-β1、IL-21、Bcl-6、Blimp-1、 AID、IαlCαl、Iα2Cα2和Ir3Cr3以及普通RT-PCR检测IgM(CHμ), IgA(CHal,CHa2)和IgG(CHr)基因动态表达情况。ELISA检测共培养上清液IL-21, TGF-β1和IgA在不同时间点的表达量,流式细胞术检测共培养淋巴细胞mIgA, mIgM在CD19+淋巴细胞中的表达变化。激光共聚焦显微镜观察共培养细胞及单纯NB分别添加Tfh细胞因子TGF-β1、IL-21、IL-4后mIgA的表达。结果IgAN患儿组TGF-β1, IL-21, Bcl-6, Blimp-1, AID, Ia2Ca2, IalCal基因表达均在第6小时最强,并随时间减弱；抗体类别转换产物CHμ、CHa1、CHa2、 CHγ在第6小时表达最强,并随时间表达逐渐减少,对照组基因无时序表达差异。患者组和对照组共培养的细胞mIgA、IL-21, TGF-β1及IgA表达随时间而增多,在第9天以后与对照组相比分别为8.16±0.07vs.5.1±0.77(%),15.17±1.6vs.5.5±1.3(pg/ml),1059±64.86vs.528±36.05(pg/ml),4.2±1.1vs.1.8±0.9(pg/ml)(P均0.05)。共聚焦结果显示Tfh细胞因子TGF-β1、IL-21、IL-4促进NB细胞IgA表达；Tfh与NB共培养显著促使IgA表达。结论体外实验显示IgAN患儿Tfh细胞有促进NB细胞发生IgA抗体类别转换,促其向分化为IgA分泌细胞分化的作用,Tfh细胞分泌的细胞因子IL-21, TGF-β1, IL-4等可能参与这一诱生过程,因此,Tfh在IgAN发病中起重要作用。 第三部分 IgAN患儿Tfh及其细胞因子诱导B细胞分泌半乳糖缺乏的IgA1 目的观察IgA肾病患儿体内外半乳糖缺乏的IgAl的表达情况,探讨Tfh细胞及其细胞因子致IgA缺陷的可能机制。方法收集IgAN患儿和正常儿童外周血,磁珠分选IgA肾病患儿外周血NB和Tfh细胞,elisa测定NB和Tfh共培养组,单独NB细胞加IL-21或TGF-β1或IL-4等Tfh细胞因子培养组12天培养上清液及IgAN肾病患儿和正常儿童外周血血清IgA和半乳糖缺乏的IgAl(galactose-deficient IgAl, Gd-IgAl)水平。结果IgAN患儿外周血血清Gd-IgAl水平为2573±540.2(U/ml),显著高于正常儿童1021±132.5(U/ml), P=0.03。IgAN患儿血清IgA为2881±611(ug/ml),稍高于正常儿童2337±428(ug/m1),但无统计学差异(p=0.47)。IgAN患儿NB和Tfh共培养细胞上清液IgA水平4.82±0.39(ug/ml),显著高于NB与IL-21培养组2.28±0.26(ug/ml),NB与TGF-β1培养组2.4±0.27(ug/ml), NB与工L-4培养组2.02±0.32(ug/ml),P值均0.001。IgA肾病患儿NB和Tfh共培养组Gd-IgAl与IgA比值为4.04±0.32(U/ug),显著低于NB与IL-21培养组7.73±1.31(U/ug),NB与TGF-B1培养组7.56±1.13(U/ug), NB与IL-4培养组8.64±1.23(U/ug),P值均0.05.结论IgA肾病患儿存在明显的IgAl分子半乳糖缺陷,Tfh细胞及相关细胞因子在诱生B细胞产生半乳糖缺陷IgAl过程中起关健的调节作用,可能参与IgAN发病。
[Abstract]:the first portion

The expression of serum IgG , IL - 21 and TGF - 尾1 in peripheral blood of children with IgAN

Objective To investigate the expression of T - cells and their cytokines , IL - 21 , TGF - 尾1 and mIgA in peripheral blood of children with IgAN ( primary and secondary IgA nephropathy , i.e . purpura nephritis and IgAN ) . The levels of serum cytokine IL - 21 in children with IgA nephropathy were 102 . 2 卤 9.5 ( pg / ml ) and 74.38 卤 2.6 ( pg / ml ) respectively ( P < 0 . 05 ) . TGF 尾 1 was 80392 卤 2274 ( pg / ml ) , which was significantly higher than that of normal children 29384 卤 1828 ( pg / ml ) , P < 0.05 . It was found that the expression of TSF and cell secretion factor and mIgA in peripheral blood of children with IgAN may play a role in the production of IgA production in children with IgAN .

the second part

IgAN children ' s T cell IgA antibody class - specific conversion in children with IgAN

Objective To investigate the effects of serum IL - 21 , IL - 21 , Bcl - 6 , Blimp - 1 , AID , I伪lC 伪l , I伪2C 伪2 and Ir3Cr 3 and normal RT - PCR on the expression of IgM ( CH 渭 ) , IgA ( CH2 ) , and IgG ( CHr ) gene in children with IgAN in vitro . The expressions of TGF - 尾1 , IL - 21 , I伪2C 伪2 , and IgG ( CHr ) were detected by real - time RT - PCR .
The results showed that the expressions of mIgA , IL - 21 , TGF - 尾1 and IgA in the control group were 8.16 卤 0.07 vs . 5.1 卤 0.77 ( pg / ml ) , 15.17 卤 64.86 vs . 528 卤 36.05 ( pg / ml ) , 4.2 卤 1.1 vs . 1.8 卤 0.9 ( pg / ml ) , respectively ( P < 0.05 ) .
Conclusion In vitro experiments show that the cells of IgAN can promote the differentiation of IgA antibody in NB cells , promote the differentiation into IgA secretion cell differentiation , the cytokines IL - 21 , TGF - 尾1 , IL - 4 , etc . , which secrete cytokines , play an important role in the pathogenesis of IgAN .

PART III

IgAN ( IgAN ) and its cytokines induce the secretion of galactose - deficient IgA1 in B cells

Objective To investigate the expression of IgA1 in peripheral blood of children with IgA nephropathy , and to investigate the possible mechanism of IgA deficiency in peripheral blood of children with IgAN and normal children .

【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R726.9

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本文编号：1839947