滋阴泻火中药对达那唑性早熟模型大鼠下丘脑Ghrelin及其受体的影响

发布时间：2018-05-23 12:37

  本文选题：滋阴泻火中药 + Ghrelin　； 参考：《复旦大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：以达那唑诱导的雌性性早熟大鼠模型为研究对象,观察性早熟大鼠模型青春期启动时下丘脑中营养相关因子Ghrelin及其受体GHSR1-α的表达变化,探讨Ghrelin/GHSR1-α在性早熟大鼠青春期启动中的作用；通过滋阴泻火中药干预性早熟模型大鼠,观察滋阴泻火中药对大鼠下丘脑Ghrelin及其受体GHSR1-α表达的影响,从而揭示滋阴泻火中药延缓青春期发育的机制。 方法：(1)选择3日龄SD雌性大鼠40只,随机分为正常组(N)、模型组(M)、生理盐水干预组(MS)和中药干预组(TCM),每组10只。M、MS和TCM组大鼠于5日龄每只皮下注射达那唑300μg进行造模。15日龄时,TCM组开始每天定时喂饲滋阴泻火中药,MS组给予等剂量的生理盐水,每5天称大鼠体重一次。20日龄时开始每天观察动物阴门开启情况,以大鼠阴门开启作为青春启动的标志。(2)选择阴门开启的模型组大鼠作为处死时间点,同时选择相应数量的剩余三组大鼠一并处死,留取大鼠外周血、下丘脑、卵巢、子宫等标本,计算子宫及卵巢指数。(3)采用放免法检测外周血中E2、FSH、LH及Leptin, Ghrelin和IGF-1的水平和下丘脑Ghrelin、GnRH的含量,受体GHSR1-α的个数及活性变化。(4)采用Real-time PCR法检测大鼠下丘脑Ghrelin及其受体GHSR1-α mRNA的表达变化。(5)应用SPSS13.0进行统计分析,结果以均数士标准差(x±S)表示。多组间比较采用One-Way ANOVA单因素方差分析或Kruskal-Wallis H多样本的非参数检验,两组间比较采用LSD或Mann-Whitney U方法,数据的相关性分析采用Bivariate-correlation方法进行。 结果：(1)各组大鼠青春期启动指标的比较：M组和MS组大鼠阴门开启的时间提前,为21-23日龄,早于N组和TCM组；TCM组外周血清E2(19.97±2.62pg/ml)、LH(16.96±1.31mIU/m1)、子宫指数(49.71±5.50)和下丘脑GnRH(18.15+3.67pg/m1)明显低于M组(24.67±4.05pg/ml、69.34±9.60、18.83±1.11mIU/ml、23.81±3.99pg/m1)和MS组(24.11±2.52pg/ml、66.53±6.87、18.81±1.08mIU/ml、22.70±2.52pg/m1)(P0.05),接近N组水平；TCM组卵巢指数(44.46±7.51)明显低于MS组(55.03±8.02)和N组(51.18±5.00)(P0.05)。(2)大鼠能量代谢指标的比较及与性发育指标的相关性分析：15日龄时M组体重(36.97±4.77g)明显高于N组(32.71±4.74g)(P0.05),TCM组15、20、23日龄体重(32.59±3.92g、44.38±8.16g、59.15±10.60g)明显低于模型组(36.97±4.77g、53.49±8.91g、69.95±9.54g)(P0.05)；中药干预组血中Leptin、 Ghrelin和IGF-1的水平分别为6.74±0.83ng/ml、67.08±16.17ng/mg和262.60±28.77ng/ml,与M组(7.10±1.05ng/ml、70.36±13.82ng/ml、250.04±31.97ng/m1)和MS(7.13±1.17ng/ml、82.70±16.56ng/ml、256.62±31.84ng/m1)组比较无明显差别(P0.05),且各组内能量代谢指标与性发育指标相关性不显著。(3)各组大鼠下丘脑Ghrelin/GHSR1-α基因的表达的比较：在Ghrelin和GHSR1-α基因的转录水平,M组(0.82±0.03、0.91±0.05)和MS组(0.87±0.03、0.88±0.03),明显低于N组(1.00±0.02、1.00±0.05)(P0.01),而TCM组(0.96±0.05、1.00±0.02)则明显高于M组和MS组(P0.01)；而各组间下丘脑Ghrelin蛋白含量和GHSR1-α有效个数及活性无显著的统计学差异。 结论：以达那唑诱导的性早熟大鼠模型在青春启动时,下丘脑Ghrelin及其受体的mRNA的含量下降,提示Ghrelin及其受体可能参与青春期启动的过程；滋阴泻火中药预防性干预可以延缓性早熟大鼠的青春期发育,对下丘脑Ghrelin及其受体基因的转录具有一定的上调作用。
[Abstract]:Objective: To study the changes of the expression of Ghrelin and its receptor GHSR1- alpha in the hypothalamus of the female precocious precocious rat model with nalazol induced precocious puberty, and to explore the role of Ghrelin/GHSR1- alpha in the puberty initiation of precocious puberty rats. The effect of traditional Chinese medicine on Nourishing Yin and reducing fire on the expression of Ghrelin and its receptor GHSR1- in the hypothalamus of rats was observed to reveal the mechanism of delaying the development of puberty by traditional Chinese medicine for nourishing yin and purging fire.
Methods: (1) 40 SD female rats of 3 days of age were randomly divided into normal group (N), model group (M), saline intervention group (MS) and traditional Chinese medicine intervention group (TCM), 10.M in each group, MS and TCM group rats at 5 day of age of each subcutaneous injection of Na 300 micron for.15 days of age, TCM group began to feed Yin and purge fire traditional Chinese medicine regularly every day, MS group gave the same agent. When the body weight was measured every 5 days, the rat's pubera opening was observed every 5 days. (2) the rat model group was selected as the time point of death, and the remaining three groups of rats were killed and the rat's peripheral blood and lower colliculus were left. The specimens of the brain, ovary and uterus were used to calculate the index of uterus and ovary. (3) the level of E2, FSH, LH and Leptin, the level of Ghrelin and IGF-1, the level of Ghrelin and GnRH in the hypothalamus, the number and activity of the receptor GHSR1- alpha in the hypothalamus were detected by radioimmunoassay. (4) the expression of Ghrelin and its receptor in the hypothalamus of rats was detected by Real-time PCR method. (5) the statistical analysis was carried out with SPSS13.0, and the results were expressed by the standard deviation (x + S). The multiple groups were compared with One-Way ANOVA single factor ANOVA or Kruskal-Wallis H multi sample nonparametric tests. The two groups were compared with LSD or Mann-Whitney U methods, and the correlation analysis of data was carried out by Bivariate-correlation method.
Results: (1) the comparison of puberty start index of rats in each group: the time of opening of the pubera in group M and MS was ahead of time, 21-23 days old, earlier than that of group N and TCM; the peripheral serum of TCM group was E2 (19.97 + 2.62pg/ml), LH (16.96 + 1.31mIU/m1), uterine index (49.71 + 5.50) and GnRH (18.15+3.67pg/m1) in the hypothalamus were significantly lower than that of M group (24.67 +, 69.34). 9.60,18.83 + 1.11mIU/ml, 23.81 + 3.99pg/m1) and MS group (24.11 + 2.52pg/ml, 66.53 + 6.87,18.81 + 1.08mIU/ml, 22.70 + 2.52pg/m1) (P0.05) were close to the N group level. The TCM group ovarian index (44.46 + 7.51) was significantly lower than that of the MS group (55.03 + 8.02) and (51.18 + 5). (2) the comparison of the energy metabolism index and the correlation with the sexual development index. The body weight of group M (36.97 + 4.77g) at 15 days of age was significantly higher than that in group N (32.71 + 4.74g) (32.71 + 4.74g), and 15,20,23 day old weight (32.59 + 3.92g, 44.38 + 8.16g, 59.15 + 10.60g) in group TCM was significantly lower than that in model group (36.97 + 4.77g, 53.49 + 8.91g, 69.95 +), and the level of traditional Chinese medicine intervention group was 6.74 +. L, 67.08 + 16.17ng/mg and 262.60 + 28.77ng/ml, compared with group M (7.10 + 1.05ng/ml, 70.36 + 13.82ng/ml, 250.04 + 31.97ng/m1) and MS (7.13 + 1.17ng/ml, 82.70 + 16.56ng/ml, 256.62 + 31.84ng/m1) group no significant difference (P0.05), and there was no significant correlation between the energy metabolism index and sexual development index in each group. (3) the hypothalamus of rats in each group A comparison of the expression of alpha gene: at the transcriptional level of Ghrelin and GHSR1- alpha genes, group M (0.82 + 0.03,0.91 + 0.05) and MS group (0.87 + 0.03,0.88 + 0.03), obviously lower than that of N group (1 + 0.02,1.00 + 0.05) (P0.01), while the TCM group (0.96 + 0.05,1.00 + 0.02) was significantly higher than that of the M group and the group. There was no significant difference in the number and activity of the effective number and activity.
Conclusion: the content of mRNA in the hypothalamus Ghrelin and its receptor in the hypothalamus induced by the dadazolazole induced precocious puberty rat model decreased, suggesting that Ghrelin and its receptor may participate in the process of puberty initiation. The preventive intervention of traditional Chinese medicine for nourishing yin and purging fire can delay the development of the green and spring period of the precocious puberty rats and the Ghrelin and its receptor base in the hypothalamus. The transcription of the cause has a certain up - regulation effect.
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R272

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本文编号：1924770