儿童急性髓性白血病患者骨髓基质细胞分泌IL-8促进白血病细胞株（HL-60）增殖的研究

发布时间：2018-10-12 18:49

【摘要】：背景急性髓性白血病(Acute myeloid leukemia,AML)患者目前缺乏特效治疗药物,尤其是儿童期患者,病情进展迅速、死亡率极高。即使通过化学治疗达到缓解,AML患者常因隐藏在骨髓微环境中微小残留病灶而再次复发。再者,原代AML细胞在体外条件下易出现自发性凋亡,而在机体内可大量增殖。上述均证明骨髓基质细胞对AML细胞增殖极其重要。IL-8是一种多细胞源性促炎因子,它在多种肿瘤患者体内高表达,与肿瘤的发生发展有着密切关系。国外已有文献报道,骨髓基质细胞能分泌多种细胞因子,包括IL-8。骨髓基质细胞是否分泌IL-8,IL-8是否够能促进白血病细胞增殖等问题国内较少报道。本实验拟采用白血病细胞株(HL-60)为模型,分离AML儿童患者骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cell,BM-MCS),通过采用共培养体系,采用ELISA法检测共培养体系上清IL-8含量、MTT法检测HL-60细胞增殖、流式细胞术检测HL-60细胞凋亡率、免疫荧光检测凋亡蛋白bax表达,进而探讨BM-MCS细胞能分泌IL-8促进HL-60细胞增殖,并通过IL-8抗体阻断加以验证。实验有助于阐明骨髓基质微环境对白血病发病的作用机制,为临床儿童AML的免疫治疗提供理论依据。目的本实验拟采用白血病细胞株(HL-60)为模型,分离AML儿童患者骨髓基质细胞,验证AML患者骨髓基质细胞能分泌IL-8促进白血病细胞株(HL-60)增殖,阐明骨髓基质微环境对白血病发病的作用机制,为临床儿童AML的免疫治疗提供理论依据。方法1.IL-8刺激HL-60细胞增殖检测:分别采用不同浓度梯度包括1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml浓度IL-8刺激HL-60细胞,24h后观察细胞形态,并用MTT法检测细胞增殖情况。2.密度梯度离心法分选临床儿童AML患者骨髓基质细胞。3.骨髓基质细胞与HL-60共培养,ELISA法检测培养上清IL-8含量。4.骨髓基质细胞与HL-60共培养,MTT法检测HL-60细胞增殖情况,并分析HL-60增殖与IL-8含量的相关性;5.骨髓基质细胞与HL-60共培养,给予IL-8抗体中和上清IL-8,采用流式细胞术检测HL-60细胞凋亡。6.骨髓基质细胞与HL-60共培养,给予IL-8抗体中和上清IL-8,采用免疫荧光结合激光共聚焦检测凋亡蛋白bax表达。7.统计学方法:计量数据以均数加减标准差表示,两组间差异比较采用t检验。检验水准α=0.05,P0.05为差异有统计学意义。结果1.IL-8刺激HL-60细胞增殖:采用不同浓度梯度包括1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml浓度IL-8刺激HL-60细胞,在IL-8浓度小于等于4 ng/ml时,随着IL-8浓度的增加,HL-60细胞增殖率不断增高,当IL-8浓度继续增加,HL-60细胞增殖率到达平台期,增殖增加不明显。2.BM-MCS细胞分泌IL-8:BM-MSC和HL-60细胞共培养,ELISA法检测培养上清IL-8浓度为(3.83±2.22)ng/ml,空白对照组培养上清IL-8含量为(0.68±0.11)ng/ml,前者显著高于后者,且有统计学差异。3.BM-MCS细胞分泌IL-8刺激HL-60细胞增殖:BM-MSC和HL-60细胞共培养,MTT法检HL-60细胞OD值为(15.16±2.03),空白对照组HL-60细胞OD值为(10.62±0.90),前者高于后者且有统计学差异。共培养体系上清IL-8含量与HL-60细胞增殖存在明显正相关(R2=0.7673;P=0.0002)。4.IL-8抗体促进共培养体系中HL-60细胞凋亡:在BM-MSC和HL-60细胞共培养体系中加入IL-8抗体,流式细胞术检测HL-60细胞凋亡率为(8.41±1.70)%,未加入IL-8抗体共培养体系HL-60细胞凋亡率为(2.00±0.59)%,前者凋亡率高于后者且有统计学差异。5.IL-8抗体促进共培养体系中HL-60细胞凋亡蛋白bax的表达:在BM-MSC和HL-60细胞共培养体系中加入IL-8抗体,免疫荧光结合激光共聚焦法检测HL-60细胞凋亡蛋白bax表达,发现bax表达呈现红色大颗粒状或小块状,说明该组HL-60细胞凋亡明显;未加入IL-8抗体共培养体系HL-60细胞bax表达呈现微粒状或粉尘状,说明该组HL-60凋亡发生相对较少。结论1.IL-8能刺激白血病细胞(HL-60)增殖,增殖率呈现浓度依赖性。2.儿童AML患者BM-MSC细胞能分泌IL-8,刺激HL-60细胞增殖,增殖率与IL-8浓度呈正相关。3.IL-8抗体通过中和儿童AML患者BM-MSC细胞分泌的IL-8,进而促进HL-60细胞凋亡,促进其凋亡蛋白bax表达。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.71

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 彭丽萍,姚程,姜振宇;正常人骨髓基质细胞支持造血的实验研究[J];中华血液学杂志;2001年12期

2 陈家佩,刘秀英;骨髓基质细胞的辐射效应及其临床意义[J];中国应用生理学杂志;1988年04期

3 陈娜娜,吴曙光,郭丹;骨髓基质细胞K~+通道的膜片钳研究[J];第一军医大学学报;2000年06期

4 郑磊,王前;碱性成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞的生物学效应[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2000年01期

5 戴冰冰,卢健,陈诗书;骨髓基质细胞的特征及其在细胞和基因治疗中的应用[J];生命科学;2000年04期

6 杨吉成,盛伟华,李丽娥,董宁征,王红卫,郭tC,王晓东,杨宗华;骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究[J];中国血液流变学杂志;2000年02期

7 姜红江,孙文学,鞠成朝,谭训香;成人骨髓基质细胞培养[J];中医正骨;2000年05期

8 杨吉成,盛伟华,李丽娥,童宁征,王红卫,郭tC,王晓东;骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2001年01期

9 傅德皓,杨述华;骨髓基质细胞的生物学特性及临床应用前景[J];中华骨科杂志;2002年12期

10 罗丽;骨髓基质细胞与凋亡[J];中国局解手术学杂志;2002年04期

相关会议论文 前10条

1 仲维广;张富强;胥春;施琥;纪舒昱;;骨髓基质细胞成骨的电子探针研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

2 刘丽;张烈焚;;骨髓基质细胞多分化潜能的研究[A];浙江省口腔医学会第二届会员代表大会暨浙江省第二十三届口腔医学学术会议论文汇编[C];2004年

3 程明秀;赵宗江;田晨;;骨髓基质细胞的不同培养方法[A];第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2013年

4 彭琳;刘敏;薛亚楠;黄世文;卓仁禧;;侧链含伯氨基的聚酰胺胺用于骨髓基质细胞基因传递[A];2009年全国高分子学术论文报告会论文摘要集（下册）[C];2009年

5 陈铖;常智杰;张淑平;赵晓初;赵南明;张秀芳;;骨髓基质细胞的培养与诱导分化[A];2000年材料科学与工程新进展（上）——2000年中国材料研讨会论文集[C];2000年

6 王华松;陈庄洪;罗永湘;;骨髓基质细胞定向成脂分化的实验研究[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

7 温昱;秦书俭;李彬;;兔骨髓基质细胞的体外培养[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

8 王华松;陈庄洪;罗永湘;;髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力影响的实验研究[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

9 关呈超;张富强;;高糖环境抑制骨髓基质细胞的分化和成骨[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

10 沈健;俞康;;血宝和再障患者血清对骨髓基质细胞的影响[A];2007年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2007年

相关重要报纸文章 前3条

1 匡远深;治脑损伤可用骨髓细胞[N];健康报;2003年

2 王雪飞 张秀花;修复软骨 骨髓基质细胞是最佳种子[N];健康报;2004年

3 张中桥;甲状腺癌与IL-8的表达有关[N];中国医药报;2000年

相关博士学位论文 前10条

1 许贞书;人血液血管细胞生成素对骨髓基质细胞生物学作用的实验研究[D];福建医科大学;2005年

2 邹立津;家猪骨髓基质细胞的多向分化与透明质酸成骨作用的实验研究[D];南昌大学;2006年

3 唐滔;骨髓基质细胞心肌移植的初步研究[D];中南大学;2003年

4 钟池;骨髓基质细胞静脉注射治疗大鼠短暂性局灶性脑缺血的研究[D];复旦大学;2003年

5 单立冬;骨髓基质细胞向神经细胞分化及对帕金森病的治疗[D];苏州大学;2004年

6 丁鹏;骨髓基质细胞迁移机制的初步探讨及其移植治疗脊髓全横断损伤的实验研究[D];昆明医学院;2005年

7 胡军;冲击波促进出生后人骨髓基质细胞成骨分化的研究[D];中南大学;2003年

8 陈镇洲;体外扩增骨髓基质细胞、血管内皮祖细胞自体移植治疗脑缺血的实验研究[D];第一军医大学;2007年

9 黄涛;蛋白酪氨酸激酶受体B基因修饰骨髓基质细胞的实验研究[D];第一军医大学;2005年

10 罗蔚锋;联合应用骨髓基质细胞和还原型谷胱苷肽治疗帕金森大鼠实验研究[D];苏州大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 施璐;儿童急性髓性白血病患者骨髓基质细胞分泌IL-8促进白血病细胞株（HL-60）增殖的研究[D];新乡医学院;2017年

2 杨红霞;骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞凋亡的影响[D];石河子大学;2015年

3 何玉婵;小白菊内酯干预Jurkat细胞粘附骨髓基质细胞的作用及机制[D];桂林医学院;2015年

4 於绍龙;BMSCs/EPCs联合移植治疗兔股骨头坏死实验研究[D];辽宁医学院;2015年

5 凡芷芯;Ly-6C~+细胞对造血调控作用及造血重建中骨髓基质细胞基因表达变化[D];上海师范大学;2016年

6 孟腾腾;Hedgehog-Gli信号通路在骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞凋亡影响中的作用及机制研究[D];石河子大学;2016年

7 熊丽溶;当归多糖对5-氟尿嘧啶损伤骨髓基质细胞的保护作用[D];重庆医科大学;2017年

8 李兴泽;骨髓基质细胞迁移机制的体外实验研究[D];青岛大学;2009年

9 李丽娥;人骨髓基质细胞的生物学特性及其分化的研究[D];苏州大学;2001年

10 韦瑛;移植的人骨髓基质细胞在体内分布与安全性评价的实验研究[D];广西医科大学;2007年

，

本文编号：2267221