CD133分子在儿童B系急性淋巴细胞白血病表达的意义及其生物学特性的初步研究

发布时间：2018-10-29 17:22

【摘要】：一、儿童B系急性淋巴细胞白血病CD133分子表达的意义目的：探讨急性淋巴细胞性白血病（Acute lymphoblastic leukemia ALL）患儿诱导化疗前后骨髓单个核细胞CD133-1、CD133-2两种分子的表达与临床预后指标的相关性。方法：选取初诊ALL患儿59例，流式细胞术检测其骨髓单个核细胞CD133-1和CD133-2的表达比例。结果：1）初诊B-ALL患儿CD133-1、CD133-2的表达与其年龄、性别、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例、LDH水平、细胞遗传学改变、融合基因、危险等级、完全缓解（CR）率及白细胞分化抗原CD38、CD58和CD66c等表达均无相关性（P0.05）（其中4例T-ALL因例数太少，无统计学意义）。2）55例B-ALL中，CD133-1表达阳性者21例（占38.2%），CD133-2表达阳性30例（占54.5%），二者表达阳性比例有显著差异（P＜0.05）。3）B-ALL组CD133两种亚型分子的表达与CD34表达虽然有显著性差异（P＜0.05），但无相关性（P＞0.05）；结论：1）初诊B-ALL患儿CD133-1、CD133-2的表达与其性别、年龄、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例、LDH水平、危险等级、融合基因、细胞遗传学改变、CR率、CD38、CD58、及CD66c等表达均无相关性。2）B-ALL患儿CD133-2的表达比例明显高于CD133-1。3）CD133表达与CD34表达无相关性。二、儿童B系ALL来源的CD133+细胞生物学特性的初步研究目的：体外分离儿童B-ALL原代白血病细胞CDl33+CD19+、CDl33+CD19-等亚群细胞，初步探讨其体外生物学特性。方法：选取4例CD133表达阳性的B-ALL患儿，经免疫磁珠法（MACS）分选出CDl33+CD19+与CDl33+CD19-细胞，并用流式细胞仪对所分选细胞的CD133-2表达进行鉴定；分选后的CDl33+CD19+与CDl33+CD19-两组亚群细胞，分别接种于含干细胞因子（SCF）、白细胞介素-3（IL-3）和白细胞介素-7（IL-7）的无血清培养基中，悬浮培养4-7周后，流式细胞术检测培养细胞的CDl33、CD19及CD34的表达，RT-PCR检测其融合基因的表达。同时以MACS分选的CD133-细胞作对照。结果：1）MACS法分选B-ALL原代白血病CDl33+CD19+与CDl33+CD19-两组亚群细胞，分选后细胞总回收数为（76.9±25.63）×106，较分选前细胞总数[（99.0±21.07）×106]低，细胞总回收率为77.7%,但二者之间无显著差异（P0.05）；流式细胞术检测所分选的细胞的CD133-2表达比例，，示两者平均比例分别为(77.5±13.61）%、(76.83±5.58)％。2）CD133+CD19+、CD133+CD19-两组亚群细胞在无血清培养基中悬浮培养平均5周（4-7周），细胞生长良好，可形成克隆细胞球；通过在4个不同时间点（d0、d14、d28、培养结束前）对两组细胞进行计数，提示CD133+CD19+亚群细胞增殖速度更快，且培养至14天左右细胞即进入增殖高峰期，上述4个时间点细胞数差异有统计学意义（P0.05）。而CD133-CD19+、CD133-CD19-两组原代细胞亚群则未形成克隆细胞球，且细胞增殖缓慢，1周内无明显细胞增殖，以后逐渐凋亡。3）CD133+CD19+、CD133+CD19-两组亚群细胞经体外无血清培养4-7周后，经流式细胞术检测，CDl33、CD19及CD34均无表达。4）2例初诊时有融合基因表达异常（分别TEL/AML1、MLL/AF4表达阳性）的B-ALL患儿，分别经无血清培养5、7周后融合基因仍表达阳性。结论：1）免疫磁珠分选技术能够成功分离纯化儿童B-ALL中CD19+CDl33+与CDl33+CD19-两组亚群细胞；2）含不同细胞因子的无血清培养基能有效支持B-ALL的CD133+细胞体外中、长期培养并维持其生物学特性；3）B-ALL中CDl33+较CDl33-细胞具有更强的体外增殖潜能,CD133-2+CD19+细胞亚群可能具有白血病干细胞特性。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R733.7

【参考文献】