血管生成相关因子在胆道闭锁肝组织中的表达及意义

发布时间：2018-11-13 17:36

【摘要】：目的:观察胆道闭锁(biliary atresia,BA)患儿肝脏中是否存在血管增生的情况。研究血管生成相关因子包括血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血小板衍生生长因子AA(PDGFAA)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)、血小板衍生生长因子受体α(PDGFRα)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)在BA患儿肝组织中的表达情况,探讨其在BA血管改变中的作用,分析其与BA肝纤维化进程的关系。方法:1.选取天津市儿童医院收治的胆道闭锁患儿20例作为葛西组、胆汁淤积症患儿8例和胆道扩张症患儿12例共20例作为对照组、天津市第一中心医院收治的由于BA肝硬化接受肝移植患儿20例作为移植组。2.HE染色观察三组患儿肝脏组织的基本病理改变。CD34染色标记血管,根据Weidner等方法计数肝脏中微血管密度。Masson染色标记胶原纤维,根据Okamoto标准判定肝脏纤维化程度。3.免疫组织化学染色及实时荧光定量PCR方法检测血管生成相关因子VEGF、HIF-1α、PDGFAA、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ在三组患儿肝组织中的蛋白及基因水平的表达情况。4.比较三组患儿血管改变的不同及各血管生成相关因子在三组患儿肝组织间的表达差异。分析各血管生成相关因子在胆道闭锁患儿血管改变及肝脏纤维化进程中的作用。结果:1.三组患儿肝脏组织病理学改变及血管增生情况对照组肝脏小叶结构接近正常,汇管区稍宽,可见少量炎症细胞浸润,无纤维化或纤维组织轻度增生。葛西组肝细胞浊肿淤胆,汇管区增宽,胆管增生,部分胆管内见浓缩的胆栓,可见不同程度的炎细胞浸润及纤维组织增生。移植组肝细胞片状萎缩坏死,间质内见大量畸形增生胆管,广泛纤维组织增生,假小叶形成。对照组CD34只在中央静脉及汇管区内小动脉和小静脉中表达。葛西组可见汇管区及纤维间隔内CD34表达明显增多,且肝实质间肝窦亦可见CD34表达。移植组肝脏见广泛增生的纤维间隔内CD34弥漫性表达。对照组,葛西组,移植组微血管密度分别为16.8±1.9、23.2±3.8、25.9±2.1(P0.05)。相比对照组,葛西组和移植组存在血管增生(均P0.017)。葛西组和移植组间微血管密度差别无统计学意义(P0.017)。2.三组患儿各血管生成相关因子的蛋白及基因表达情况VEGF在对照组肝细胞,胆管细胞均呈中度阳性表达,而在葛西组和移植组上述细胞中均可见VEGF强阳性表达。HIF-1α在对照组为阴性,大部分肝细胞中未见表达,仅在个别肝细胞见细胞核染色;葛西组中,HIF-1α呈强阳性广泛表达于肝细胞核及其胞质中,移植组亦见肝细胞中HIF-1α强阳性表达。PDGFAA、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ在对照组中均只在汇管区部分细胞如纤维细胞,巨噬细胞中呈弱阳性表达,胆管细胞和肝细胞不表达。PDGFRα在葛西组中汇管区表达增多,并且开始表达在胆管细胞,肝细胞也出现少量表达,而在移植组中该两种因子表达减少。PDGFBB和PDGFRβ在葛西组与移植组中均在汇管区和胆管细胞中表达增多。上述免疫组化染色结果经IPP图像分析软件半定量后进行比较,结果显示除PDGFAA外,VEGF、HIF-1α、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ三组间表达均存在差异,葛西组和移植组表达均高于对照组(P0.05)。葛西组和移植组比较显示,VEGF,PDGFBB在移植组表达高于葛西组,PDGFRα在葛西组表达高于移植组(均P0.017)。PCR结果显示,所有血管生成因子在三组间表达均存在差异,葛西组和移植组表达均高于对照组(P0.05)。葛西组和移植组比较显示,VEGF、HIF-1α、PDGFBB在移植组表达高于葛西组,PDGFRα在葛西组表达高于移植组(均P0.017)。3.血管生成相关因子蛋白表达情况与血管增生和纤维化程度的相关性分析VEGF的表达水平与微血管密度呈正相关(P0.05)。HIF-1α、PDGFAA、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ的表达水平和微血管密度无相关性。此外,HIF-1α和VEGF蛋白表达呈正相关(P0.05)。葛西组中HIF-1α,PDGFBB的蛋白表达与肝组织标本纤维化程度呈正相关(均P0.05),VEGF,PDGFAA、PDGFRα、PDGFRβ与纤维化程度无相关性。微血管密度与纤维化程度呈正相关(P0.05)。结论:胆道闭锁患儿肝脏存在血管增生的情况,缺氧诱导下的HIF-1α-VEGF信号通路上调可能是BA中调控血管增生的机制。PDGF家族成员在BA肝纤维化进展的早晚期发挥不同作用。BA中血管增生和纤维化进程相互作用,促进病变发展。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R725.7

【参考文献】