儿童急性髓性白血病（AML）诊断相关miRNAs标记物的表达及功能研究

发布时间：2018-11-17 21:04

【摘要】：目的:研究表明,差异表达的miRNAs可以参与白血病的发生。基于生物信息学技术预测结果,我们检测了几种与儿童急性髓性白血病发生密切相关的miRNAs的表达情况,分析其在儿童AML诊断和预后中的意义,并探讨其功能。方法:我们前期使用生物信息学分析技术,筛选了与初诊儿童急性髓性白血病最为密切相关的三种miRNAs;随后,我们随机抽取了83例初诊AML患儿骨髓标本,并以29例非恶性病儿童正常骨髓作为对照,利用实时荧光定量逆转录酶链反应(qRT-PCR)方法检测这三种miRNAs的表达情况(以2-△△Ct表示),并结合临床资料分析其意义;最后,进一步探讨其在细胞功能方面的影响以及可能的作用机制。结果:1.前期生物信息学预测结果:三种mi RNAs(miR-196b,miR-155,miR-25)与儿童AML发生密切相关;IGFBP7基因是miR-196b的一个预测靶基因。基于改良POMA软件的生物信息学分析显示,与初诊儿童AML诊断最为密切相关的三种mi RNAs是miR-196b,miR-155和miR-25(Wilcoxon test,p0.05;NOD=30,28和32,TFP=0.289,0.242和0.191).2.临床标本验证结果:miR-155在初诊AML患儿组显著高于对照组(p0.0001);mi R-196b在单核细胞系AML(M4/5组)显著高于对照组(p=0.032)和非单核细胞系AML(非M4/5组)(p0.0001)。3.三种miRNAs对预后的影响:高水平的miR-196b,miR-155均与不良预后(整体生存率OS)相关(Log Rank p0.0001,=0.011);mi R-25与AML患儿预后未发现明显相关性(Log Rank p0.05)。综合WHO 2008推荐方法和NCCN 2015AML指南进行预后分组:miR-196b,miR-155在预后良好组表达最低(p0.001,p=0.0002);在诱导缓解一疗程评估中:miR-196b在未缓解组表达高于缓解组(p=0.018),miR-155,miR-25未发现统计学差异(p0.05);在不同突变类型间:miR-196b以FLT3-ITD组最高(p=0.037),miR-155,miR-25的表达水平以C-Kit组最高(p=0.004,0.047);在不同染色体核型间亦有明显差异:miR-196b表达水平以t(8;21)组最低(p=0.0002),11q23(MLL)组最高(p=0.0002),miR-155表达水平以t(15;17)组最低(p=0.0004)。4.与其它临床资料的相关性:在白细胞(WBC)分组和年龄分组比较中发现,miR-196b表达水平均有显著统计学差异,WBC≥100?109/L组和年龄≤12月龄组均明显高表达(p=0.004,0.029),且miR-196b表达水平与初诊血小板计数呈显著正相关(Spearman’s r=0.31,p=0.004),而miR-155和miR-25表达水平在三者中均未发现统计学差异。5.miR-196b候选靶基因IGFBP7在初诊儿童AML临床样本中的表达水平显著高于对照组(p0.0001),Kaplan-Meier生存分析结果提示,初诊时IGFBP7表达高的AML患儿预后较好,整体生存率高于低表达者,差异具有统计学意义(p=0.045)。6.miR-196b对白血病细胞株MV4-11细胞具有促进增殖、抑制VP16诱导的凋亡的作用,此外,还对维甲酸诱导的NB4细胞分化具有抑制功能。7.通过脂质体瞬时转染293T细胞上调/下调miR-196b表达后,我们发现,IGFBP7基因与miR-196b之间存在负调控关系。结论:1.初诊儿童AML中mi R-155,miR-196b较对照组差异高表达,且与预后相关,有望成为辅助儿童AML的诊断和预后判断的新型标记物2.外源性高表达miR-196b具有促进白血病细胞增殖、抑制凋亡和分化的功能,有望成为儿童AML治疗的新靶点。3.IGFBP7是miR-196b的一个靶基因,二者间的调控关系促进了AML发生和发展。有待于进一步深入的细胞功能学实验验证。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71

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