Prader-Willi综合征临床表型、生长激素受体基因外显子3多态性及早期筛查和干预的多中心研究

发布时间：2018-12-07 20:47

【摘要】：第一部分 Prader-Willi综合征的临床表型分析及中外比较目的Prader-Willi综合征(PWS)的临床表型复杂多样,并随年龄增长而变化。1993年由Holm等人提出了PWS的临床诊断标准,并一直沿用至今。PWS的分子遗传学诊断方法也日益成熟,尤以甲基化分析方法中的甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)及甲基化特异性多重连接依赖的探针扩增(MS-MLPA)技术应用最为广泛。国内对PWS的研究资料较少,对我国PWS的发病情况、分子遗传机制、临床表型特点和分子诊断学策略知之甚少。本研究旨在分析我国PWS患儿的临床表型特征,并与国内外的相关研究进行比较,同时对我国PWS患儿的不同分子遗传机制进行鉴别,探讨基因型与临床表型间的关系,为临床早期筛选及进一步行分子遗传学诊断提供帮助。方法以2007年1月至2012年6月间临床怀疑或诊断为PWS的70例患儿为研究对象,采用MS-PCR方法进行快速的分子筛查和诊断。根据Holm等提出的临床诊断标准中的主要、次要标准,总结PWS确诊病例的临床表型特征并与国内外相关文献进行比较,进而归纳出我国PWS患儿的典型临床特征。对经MS-PCR分析确诊的患者,采用MS-MLPA和短串联重复序列(STR)技术进行不同分子遗传机制的鉴别。结果70例临床疑诊患儿中,男性42例,女性28例,年龄分布在1月-14岁。经MS-PCR分析,31(44%)名患儿确诊为PWS,其中男性18例,女性13例。对31例患儿进一步行MS-MLPA分析,明确26例为父源缺失型(83.9%),另5例为甲基化异常,后经STR遗传连锁分析,明确均为母源同源二倍体型(mUPD,16.1%),父源缺失型所占比例高于欧美高加索人群而与亚洲人群相似。共有25名患儿的临床诊断评分满足PWS的临床诊断要求,另6名9月龄以下的婴儿,分值均低于5分。所有患儿均存在母孕期胎动减少、新生儿期肌张力低下、喂养困难。过度摄食、肥胖、性腺发育不良的发生占77.42%(24/31)以上,特殊面容的发生占54.8%(17/31),35.5%(11/31)的患儿存在皮肤抠/抓后的活动性皮损,仅有12.9%(4/31)的患儿诊断为身材矮小。与mUPD型相比,缺失型患儿更易出现肥胖、过度摄食、构音障碍和手/足小。与中外研究相比,中国PWS患儿发育迟缓、身材矮小、唾液粘稠和色素减低的发生率较低,特殊面容、皮损、行为问题、睡眠障碍、手足/小及眼睛问题所占比例与台湾人群的研究结果无差异,但显著低于欧美人群,而母孕期胎动减少、婴儿期喂养困难及性腺发育不良的发生率则高于欧美人群。结论PWS分子遗传学诊断的具体策略,推荐以MS-PCR方法作为快速筛查手段,在此基础上结合MS-MLPA和STR遗传连锁分析进行不同分子遗传机制的鉴别。母孕期胎动减少、中枢性肌张力低下、喂养困难是中国PWS患儿临床诊断的重要指征,性腺发育不良、过度摄食和肥胖也是重要的临床线索,对于皮肤色素减低同时伴有肌张力低下及喂养困难者也应提高警惕,而身材矮小的发生并不多见。第二部分 Prader-Willi综合征患儿GHR基因外显子3的多态性研究目的生长激素受体(Growth hormone receptor, GHR)基因外显子3多态性,是目前临床应用生长激素(Growth hormone, GH)治疗疾病的研究热点。本研究目的在于了解中国PWS患儿GHR基因外显子3多态性,并与其他人群的多态性分布进行比较,为探讨重组人生长激素(rhGH)在中国PWS患儿的临床应用前景及疗效与遗传多态性间的相关性提供线索。方法回顾性分析57例经分子遗传学确诊的PWS患儿。采用多重聚合酶链反应(PCR)的方法对GHR基因外显子3进行多态性分析。与中外正常人群、不同病因的矮小人群和肥胖人群进行比较,总结中国PWS患儿GHR基因外显子3的多态性特点。结果57例分子遗传学确诊的PWS患儿中,GHR外显子3三种基因型fl/fl、fl/d3、d3/d3的分布频率分别为70%、23%和7%,与中国不同地区正常儿童的分布频率无差异,但d3/d3和f1/d3基因型的频率低于正常欧洲儿童。与不同病因身材矮小儿童进行比较,本研究PWS患儿GHR外显子3基因型的分布频率与特发性矮小(ISS)及Turner综合征(TS)患儿的分布无差别,但不同于生长激素缺乏症(GHD)的患儿。与我院以往的肥胖/超重儿童GHR基因外显子3多态性的研究相比,中国PWS患儿GHR外显子3基因型的分布特点与肥胖/超重儿童并无明显差别。将文献中报道的PWS患儿GHR外显子3基因型与本研究中PWS患儿基因型的分布进行比较,发现不同人群PWS患儿GHR外显子3基因型分布存在差异。结论中国PWS患儿GHR基因外显子3的多态性分布与正常人群并无差别,d3-GHR所占比例显著低于GHD人群。中国PWS患儿GHR基因外显子3的多态性分布与国外研究不完全一致,d3-GHR等位基因所占频率较低,推测GHR基因外显子3多态性可能存在种族差异。结合之前的研究结果,推测中国PWS患儿身材矮小发生率低可能与缺失型GHR基因外显子3所占比例低有关。第三部分 Prader-Willi综合征早期筛查和干预的多中心研究目的PWS的临床诊断标准已于1993年由Holm等人提出并得到公认,但根据我院以往的研究发现,婴儿期患者的临床表型多不能符合临床诊断的要求。本研究旨在通过全国范围内多个中心的参与,了解PWS在不明原因中枢性肌张力低下和喂养困难新生儿中所占的比例,探讨中国PWS患儿新生儿期的临床特点及早期筛查的临床指征,观察GH治疗等早期干预的疗效。方法对2012年5月至2013年8月各中心送检的临床疑似PWS患儿63例进行分析,采用MS-PCR方法进行快速筛查和诊断。采用MS-MLPA结合STR遗传连锁分析进行分子遗传机制的鉴别。记录并分析确诊患者的身高、体重、头围、出生史及临床表型特征,比较GH干预前后的体格和生化监测指标的变化情况。结果63例各中心送检的临床疑似PWS患儿,男性34例,女性29例,年龄分布在5～28天。经MS-PCR筛查,共确诊PWS患儿16例(25%)。经MS-MLPA结合STR遗传连锁分析,发现其中13例为父源缺失型(81.3%),3例为mUPD型(18.8%)。16例确诊患儿中足月产13例、早产1例、过期产2例。顺产4例,剖宫产12例。宫内窘迫10例,异常胎位5例。16例PWS患儿均存在母孕期胎动减少、中枢性肌张力低下和喂养困难(100%),特殊面容6例(37.5%),性腺发育不良13例(81.25%),其中男性隐睾9例(90%)、女性阴唇阴蒂偏小4例(66.7%),皮肤色素减退者8例,手/足小不明显。4名患儿接受GH干预治疗,持续时间1-6月不等,GH治疗后身高和体重由生长曲线的P50逐渐升高至P90,甲状腺功能、生长因子、空腹血糖、空腹胰岛素、血脂等生化指标在治疗前后均无异常发现和变化。结论在中国新生儿人群中,尤其在有不明原因中枢性肌张力低下、吸允无力、喂养困难的新生儿中,PWS约占四分之一,临床医生应加强对本病的早期识别。借助MS-PCR甲基化分析的方法,可实现PWS的早期筛查和快速诊断,其中母孕期胎动减少、中枢性肌张力低下和喂养困难是中国PWS患儿在新生儿期共有的重要临床特征,而外生殖器发育不良和皮肤色素减低的存在有助于提高早期筛查的阳性率。婴儿期即给予GH干预治疗可改善患儿身高、体重等体格发育指标,对智能发育、内分泌代谢功能的影响尚待继续深入地研究随访。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R725.8

【参考文献】