【摘要】：目的：研究Omi/HtrA2特异性抑制剂（Ucf-101）对早产鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤的保护作用。 方法：以剖宫术取出孕21d大鼠作为早产鼠，72只新生早产Wistar大鼠在生后12h随机分为对照组、高氧组、高氧+Ucf-101组，每组24只，高氧+Ucf-101组在高氧暴露前10min，按1.5μmol.kg~(-1)腹腔注射Ucf-101，其余两组在相同时点注射等量的9g.L~(-1)盐水（N.S），高氧组和高氧+Ucf-101组持续暴露于950ml·L~(-1)氧气中，对照组置于同一室内常压空气中。分别于暴露1d、3d、7d时，每组取动物8只，留取肺组织标本。左肺制作石蜡切片，采用HE染色观察不同时间点其肺组织病理改变；采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-peroxidase,SP）法检测Omi/HtrA2、X连锁凋亡抑制蛋（X-linked inhibitor of apoptosisprotein, XIAP）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)在各组肺组织的表达；采用原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡的情况；右肺制作冰冻切片，采用间接免疫荧光双染色法，在激光共聚焦显微镜观察Omi/HtrA2在细胞内的转位。 结果：(1)肺组织病理学改变：各实验组暴露1d肺组织病理学检查均无差异。对照组暴露1d、3d、7d，肺组织未见病理改变，肺组织发育逐渐成熟，肺泡结构逐渐规整，大小均匀，肺泡间隔变薄。与对照组比较，高氧组肺组织可见肺泡炎性改变和肺发育滞后，而高氧+Ucf-101组病理改变较高氧组减轻。(2) Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9蛋白在肺组织的表达与分布：Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9普遍表达于早产鼠肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及血管内皮细胞的胞质中。对照组Omi/HtrA2表达微弱，高氧组Omi/HtrA2随着暴露时间的延长表达逐渐明显，高氧+Ucf-101组在同一时间点较高氧组减轻，，与对照组相比有统计学差异（平均光密度值AOD：1d5.13±0.23vs8.12±1.16vs7.19±0.51、3d5.27±0.80vs9.64±0.8vs8.42±1.67、7d5.42±0.32vs11.95±1.05vs9.07±0.53,1d、3d、7d P＜0.01)；对照组XIAP表达明显，高氧组XIAP随着暴露时间的延长表达逐渐微弱，高氧+Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显增加,与对照组相比有统计学差异(AOD：1d6.91±0.69vs5.69±0.71vs5.98±0.86、3d7.25±2.34vs2.91±0.79vs4.57±1.04、7d6.84±1.0vs1.61±0.75vs3.90±0.98,3d、7d P＜0.01)；对照组Caspase-9表达微弱，高氧组Caspase-9随着暴露时间的延长表达逐渐明显，高氧+Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显减轻，与对照组相比有统计学差异(AOD：1d3.51±0.56vs6.33±1.10vs4.78±1.18、3d4.23±0.59vs12.17±1.71vs8.86±0.69、7d4.10±0.92vs16.28±1.38vs12.47±1.23，1d、3d、7d P＜0.01)。(3) TUNEL检测凋亡结果：对照组有少量TUNEL阳性细胞，高氧组随着暴露时间的延长TUNEL阳性细胞逐渐增加，高氧+Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显减少，与对照组相比有统计学差异(凋亡指数：1d14.13±1.70vs25.64±1.01vs20.94±1.70、3d14.05±2.07vs44.58±1.89vs31.38±1.35、7d14.25±1.36vs55.62±1.62vs40.65±1.83，1d、3d、7d P＜0.01)(4) Omi/HtrA2的胞内转位：对照组有少量转Omi/HtrA2位阳性细胞，高氧组随着暴露时间的延长Omi/HtrA2转位阳性细胞逐渐增加，高氧+Ucf-101组在同一时间点较高氧组明显减少，与对照组比较差异有统计学意义（转位率：1d6.47±0.84vs23.58±2.12vs17.33±0.95、3d7.24±0.95vs39.12±2.23vs32.58±1.25、7d7.80±0.67vs54.12±1.94vs40.57±1.67，1d、3d、7d P 0.01）。 结论： Ucf-101可能减少Omi/HtrA2在肺细胞胞质中的表达和线粒体的转位，抑制肺细胞凋亡，从而减轻早产鼠高氧肺损伤。
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【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R722.6
【参考文献】
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2403686
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