过氧化物酶增殖体受体-γ在哮喘小鼠气道重塑中的作用机制探讨

发布时间：2019-01-18 08:12

【摘要】：目的：1.建立OVA致敏和激发的昆明小鼠慢性哮喘气道重塑模型；2.通过观察哮喘组、干预组及对照组小鼠肺组织PPAR-γ阳性细胞数的变化，肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数和VEGF、IL-13水平的变化及三组小鼠肺组织病理、气道形态学变化，探讨PPAR-γ在支气管哮喘气道重塑发病机制的作用及其早期干预对哮喘气道重塑的影响。方法：4～6周龄，18～22g SPF级雌性昆明小鼠30只（由大连医科大学动物实验中心提供），随机分为3组:哮喘模型组（哮喘组）、罗格列酮干预组（干预组）及对照组，每组10只。以鸡卵清蛋白（OVA）致敏的方法建立哮喘模型：哮喘组及干预组小鼠于实验第0、7、14天给予20μg OVA+150μl AL(OH)3+50μl NS(100mg/L)混悬液腹腔注射致敏；第27、28、29天，给予50μl OVA-NS(2g/L)滴鼻激发；第30～60天将哮喘组小鼠置于自制雾化箱内给予2%OVA生理盐水雾化液超声雾化吸入，每天1次，每次持续30分钟；干预组小鼠雾化前1小时首先给予罗格列酮5mg/Kg灌胃，雾化吸入OVA溶液方法同哮喘组；对照组以生理盐水代替致敏液、激发液及雾化液，方法同哮喘组。在末次雾化24小时后,三组小鼠颈椎脱位处死、取材，取肺泡灌洗液，离心，上清液采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定VEGF、IL-13水平，沉渣在光学显微镜下进行嗜酸性粒细胞计数；制备肺组织石蜡切片，，分别行HE染色及免疫组化，HE染色肺组织切片在显微镜观察小鼠肺组织病理变化及气道形态学改变：总管壁面积/支气管基底膜周径(WAt／Pbm)、平滑肌面积/支气管基底膜周径（WAm／Pbm）及气道平滑肌（ASM）厚度；免疫组化肺组织切片在显微镜下分别观察三组小鼠4个视野内肺泡区染色阳性细胞(棕黄色)的百分比，计算PPAR-γ阳性数；取出所得实验数据均采用SPSS11.5软件进行分析。结果： 1.激发后哮喘组小鼠出现不同程度的烦躁不安、呼吸急促、前肢搔鼻、俯伏不动，二便失禁，皮毛失去光泽等症状；干预组小鼠干预前症状同哮喘组小鼠，干预后此类症状减轻；而正常组小鼠无此类症状。 2.肺组织病理学观察：在高倍镜下观察，哮喘组小鼠气管壁增厚，管腔变形、呼吸道可见上皮细胞脱落、粘液分泌增多、气道平滑肌增厚、血管管壁增、粘膜下及管壁周围炎性细胞浸润明显；干预组可见上皮细胞偶有脱落，粘膜相对光滑完整，管壁及血管壁及炎性细胞浸润均明显轻于哮喘组；对照组小鼠气管及肺泡结构正常，支气管粘膜上皮完整，未见明显炎症细胞。 3.气道形态学分析：哮喘组、干预组及对照组小鼠总管壁面积/支气管基底膜周径（WAt/Pbm）分别为15.25±1.43μm~2/μm、11.94±1.26μm~2/μm、10.79±2.20μm~2/μm；平滑肌面积/支气管基底膜周径（WAm／Pbm）分别为4.17±0.70μm~2/μm、2.88±0.63μm~2/μm、4.02±0.77μm~2/μm；气道平滑肌（ASM）厚度分别为15.7±2.0μm、10.7±1.3μm、5.1±1.8μm。哮喘组小鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm、ASM厚度均较干预组及对照组明显升高（P0.01），差异有统计学意义；干预组小鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm、ASM厚度均较对照组明显升高（P0.01），差异有统计学意义。 4.小鼠BALF中嗜酸性粒细胞计数：哮喘组小鼠为12.32±0.91×106/ml，干预组小鼠为7.13±0.41×106/ml，对照组小鼠为0.50±0.08×106/ml。哮喘组嗜酸性粒细胞计数水平明显高于干预组及对照组（P0.01），差异有统计学意义；干预组嗜酸性粒细胞计数与对照组比较（P0.01），差异有统计学意义。 5.肺泡灌洗液IL-13、VEGF水平：哮喘组、干预组及对照组BALF中IL-13水平分别为59.82±16.98pg/ml、40.25±3.87pg/ml、35.05±6.67pg/ml；VEGF水平分别为246.14±15.77pg/ml、32.75±2.45pg/ml、85.40±8.32pg/ml。哮喘组IL-13、VEGF水平明显高于对照组及对照组（P0.01）；干预组BALF中IL-13、VEGF水平较哮喘组有所下降，与对照组比较仍有显著性差异(PO．01)。 6.免疫组化观察肺组织PPAR-γ阳性计数：哮喘组为13.05±0.83，干预组为18.14±0.83，对照组为7.63±0.74；干预组PPAR-γ阳性细胞数明显高于对照组、哮喘组(P0.01)；哮喘组PPAR-γ阳性细胞数高于对照组（P0.01）。结论： 1.昆明小鼠经卵蛋白致敏及反复激发可建立理想哮喘模型，同时具备气道炎症及气道重塑两大特征； 2.PPAR-γ在哮喘小鼠气道上皮及炎性细胞高表达，参与了小鼠的气道重塑过程； 3.活化的PPAR-γ可通过抑制Th2细胞分别在炎症水平、气道平滑肌的增生、气道小血管增生的方面干预哮喘气道重塑。
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【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R725.6

【参考文献】