1、AcSDKP对免疫性心肌炎大鼠心脏的作用 2、AcSDKP对Dahl盐敏感高血压大鼠的作用 3、AcSDKP在儿童急

发布时间：2019-01-29 19:27

【摘要】：研究目的自身免疫性心肌炎是一种以侵袭性心肌收缩功能损害,心脏增大和心功能衰竭为主要特征的致死性疾病。病毒感染和自身免疫性心肌损害是病理损害的重要因素,目前尚无有效治疗。免疫性心肌炎时炎性细胞浸润,心肌细胞坏死,发生纤维化,进一步加重发展成扩张性心肌病,最终导致心功能衰竭。心肌蛋白(CM)是自身免疫性心肌炎和病毒性心肌炎的主要自身抗原。经外源性心肌蛋白免疫后的大鼠是常用的自身免疫性心肌炎的疾病模型,主要是由CD4+T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病。已知N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是一种内源性抗炎和抗纤维化的四肽,其前体是胸腺素p4,存在于正常人血浆和组织中,是多向分化造血干细胞增殖抑制剂。它首先在骨髓中合成、贮存,然后持续、缓慢释放入血,分布到肾脏、心脏、肝脏、睾丸等组织和器官中,人外周血单核细胞、血浆、尿液内都能检测到该因子。AcSDKP几乎可以被血管紧张素转换酶(ACE)完全水解,应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)后血浆浓度会明显增高。在自身免疫性心肌炎(EAM)小鼠,ACEI可降低小鼠心肌炎的发病率,减轻严重程度,减轻迟发性过敏反应。我们推测AcSDKP可能是通过调节免疫系统来改善EAM大鼠的心脏重建和功能障碍。研究方法(1)用猪心肌球蛋白免疫Lewis大鼠,建立EAM大鼠模型。(2)将实验大鼠分为2组,一组为AcSDKP治疗组,皮下埋入装有AcSDKP的迷你缓释泵；另一组为空载对照组,皮下埋入仅装有生理盐水的迷你缓释泵。同时用Lewis大鼠设立对照组,同样分为AcSDKP治疗组和空载组两组。(3)实验过程中每周检测收缩期血压,四周后检测心脏超声,处死大鼠,取血浆、脾、心脏。(4)心脏石蜡包埋,病理切片,免疫染色,检测胶原含量及炎性细胞浸润。提取脾脏单个核细胞,流式检测T淋巴细胞。酶联免疫吸附法(Elisa),蛋白印迹法(Western Blots)检测血浆中TNF-α, IL-1β, IL-17等细胞因子含量。实验结果(1)在EAM大鼠模型,与空载治疗组相比,AcSDKP治疗组心脏巨噬细胞,树突状细胞和辅助性T淋巴细胞等炎性细胞浸润减少,固有免疫细胞因子(TNF-αIL-1β)和获得性免疫细胞因子(IP-10,IL-17)的表达减低。(2)AcSDKP可改善EAM大鼠心脏的收缩和舒张功能,减轻心脏肥大,减少炎症反应和心肌纤维化。(3)在正常对照Lewis大鼠,AcSDKP治疗组与空载治疗组相比无明显差异。结论AcSDKP通过固有免疫和获得性免疫,抑制EAM大鼠心脏炎性反应和纤维化,对EAM大鼠心脏有明显保护性作用,可抑制心脏肥大,改善心脏功能。研究目的高血压是目前世界上最常见,发病率最高的心血管疾病之一,长期高血压的患者,心、肾等的血管发生纤维化重塑,造成心血管肥厚,肾功能损伤。高血压是多基因遗传和多环境因素共同作用的结果。盐的摄入在高血压的形成中起着关键的作用,一方面会直接导致肾脏钠储留,引起血浆容量增加,从而形成高血压；另一方面会使类洋地黄类物质增加,抑制钠泵,使细胞内Ca2+浓度增加,从而导致血管平滑肌或心肌的收缩,引起高血压。Dahl盐敏感(DSS)大鼠常被用来做为人类盐敏感高血压的动物模型。DSS大鼠给予高浓度盐饮食后发生高血压,极易出现终末器官损害(EOD),包括肾和心功能损害,辅助性T细胞(Th)参与高血压EOD的发生。文献报道在实验性自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠中,Th细胞参与发病,我们前期实验也发现AcSDKP通过固有免疫和获得性免疫调节对EAM大鼠产生明显保护性作用,抑制心脏炎性反应和纤维化,改善大鼠心脏重塑和功能障碍。同时在醋酸脱氧皮质酮(DOCA)盐敏感性高血压大鼠和5/6肾切除高血压大鼠模型中,AcSDKP可明显改善肾脏功能,抑制肾纤维化发生。我们推测AcSDKP可能通过免疫调节改善DSS高血压大鼠的EOD。研究方法(1)给予Dahl盐敏感大鼠不同盐浓度食物,浓度分别为0.23%盐浓度和4.O%盐浓度食物。给予4.0%盐浓度食物组再分为2个治疗组,一组为AcSDKP治疗组,皮下埋入装有AcSDKP的迷你缓释泵；另一组为空载对照组,皮下埋入仅装有生理盐水的迷你缓释泵。(2)每周监测收缩期血压,尿白蛋白含量。(3)6周后麻醉状态下检测肾小球滤过率(GFR),处死大鼠后留取血浆、肾脏及脾脏标本。(4)肾脏石蜡包埋,制作病理切片,进行免疫染色。并提取脾脏单个核细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞等免疫细胞。Elisa方法,Western Blots法检测脾脏细胞因子表达。实验结果对于DSS盐敏感高血压大鼠模型,AcSDKP不能降低大鼠的血压,也不能增加肾小球滤过率,但可明显减低Dahl盐敏感大鼠尿白蛋白含量,抑制巨噬细胞等炎性细胞在肾脏的浸润,最终减少肾脏炎症反应和纤维化。结论AcSDKP可以降低Dahl盐敏感大鼠尿白蛋白含量,减轻肾脏纤维化。研究目的N-乙酰基-丝氨-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(AcSDKP)是一种产生于骨髓,广泛存在于血液和组织中的四肽,它是一种抑制细胞增殖的细胞因子。AcSDKP能够刺激血管新生,尤其是肿瘤血管新生,在人类乳腺癌,头颈癌,肾癌,肺癌,皮癌,卵巢癌,前列腺癌等多种癌症中的表达升高。急性髓系白血病患者血浆中浓度增高,骨髓增殖性疾病患者血浆中浓度增高更为明显。AcSDKP通过抑制单核细胞、巨噬细胞和细胞因子,如PDGF、ET-1、MMPs等的浸润,抑制成纤维细胞增殖和胶原合成。同时AcSDKP可通过抑制TGF-β的下游调控因子Smads,减低NF-κB等的活性,抑制胶原合成,明显减轻组织器官的纤维化,同时AcSDKP有促进血管新生的作用。血管内皮生长因子(VEGF)通过与相应的血管内皮生长因子受体结合刺激血管内皮细胞增殖和迁移,增加微血管通透性,促进新生血管的生成,与白血病的发生和转移有着密切的关系。我们前期的研究结果,表明AcSDKP可能通过调控VEGF途径来参与白血病发病中的血管新生,为研究AcSDKP在儿童急性白血病中的作用,我们本部分初步探讨了AcSDKP在儿童急性白血病中的表达及与血管内皮生长因子的相关性。研究方法收集儿童急性白血病的血液标本,提取血浆,应用酶联免疫吸附(Elisa)法检测血浆AcSDKP浓度,同时检测患儿血浆血管内皮生长因子水平,以正常儿童血浆作对照,比较急性白血病儿童血浆AcSDKP及VEGF表达变化及两者相关性,初步探讨AcSDKP在儿童急性白血病发生中的作用。实验结果儿童急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病血浆AcSDKP和VEGF表达水平均高于正常对照。治疗达完全缓解后血浆AcSDKP及VEGF水平接近正常。AcSDKP与VEGF表达水平具有一致性。结果提示VEGF和AcSDKP均与儿童急性白血病发病相关。结论儿童急性白血病发病中VEGF及AcSDKP表达水平增加,进一步证明血管新生在白血病发病中发挥重要作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R593.2;R544.1

【参考文献】