儿童血液系统端粒酶催化亚单位基因突变与表达的研究

发布时间：2019-10-28 18:21

【摘要】：目的：检测儿童血液系统疾病患者端粒酶催化亚基（humantelomerase reverse transcriptase, hTERT）基因的突变与表达，并分析不同血液系统疾病与hTERT突变与表达的情况，hTERT在经临床治疗干预的儿童急性白血病患中的表达，提高对端粒酶相关疾病的认识，及加深对端粒酶与儿童血液系统疾病的关系的认识。 方法： 1.据文献报道成人急性髓系白血病患者hTERT基因15号外显子为高发突变区，本研究也选择该区在儿童血液病患者的突变状况：收集71例重庆医科大学附属儿童医院血液内科住院的血液系统疾病确诊患者，其中有47例急性白血病，23例非白血病患者（含2例再生障碍性贫血患者）；再提取患者外周血标本中全基因组DNA，PCR扩增hTERT基因的15号外显子；利用Sanger法对PCR产物进行测序，分析测序结果。 2.检测接受化疗的儿童急性白血病患者hTERT基因表达水平收集60例我院血液内科住院的血液系统疾病确诊患者，其中37例急性白血病患者接受临床规范治疗，23例非白血病患者，提取外周血标本中总RNA，逆转录为cDNA,荧光定量RT-PCR检测hTERT基因表达水平，以GAPDH基因表达为对照。以非参数Mann-Whitney和Kruskall-Wallis检验分别对两组和多组间表达水平的比较，置信水平α=0.05，用SPSS17.0统计软件分析。 结果： 1. hTERT基因15号外显子突变分析：2例再生障碍性贫血患者均在5号染色体1254714碱基发生C＞A杂合突变（该位点距离15号外显子转录起始位点上游91bp）。而47例儿童急性白血病患者和其余21例非白血病组未发现该基因区域的突变。 2. hTERT基因表达分析：经临床治疗干预并达缓解的B-ALL、PreB-ALL与T-ALL组间hETRT表达水平有统计学差异，三组间hTERT表达水平高低为PreB-ALL＜B-ALL＜T-ALL。但白血病组与非白血病组间、AML与ALL组间、ALL中高危、中危及标危组间、初诊外周血WBC≥100×109/L,50×109/L-100×109/L与＜50×109/L组间、异常核型与非异常核型组间、年龄≥10岁的ALL患者与1-10岁ALL患者组间hTERT的表达水平差异无统计学意义。 结论： 1.儿童急性白血病与成人AML的hTERT基因突变位点不同，成人AML患者hTERT基因高突变区在儿童急性白血病中突变率低；2例再生障碍性贫血患者有相同的hTRET基因杂合突变，该基因突变位点与端粒相关的再生障碍性贫血相关，并值得进一步研究。 2.经临床治疗干预的并达缓解的儿童急性白血病患者的hTERT基因表达水平与非白血病患者无显著差异，仅B-ALL、PreB-ALL与T-ALL组间仍有统计学差异，其他临床危险程度分级间hTERT基因表达水平无差异，hTERT表达水平可作为儿童急性白血病缓解的分子参考指标之一。
【图文】：

XR 系统成像：在紫外光下进行成像，，检测 PCR 扩增产物位于无杂带。序大基因公司测序，测序引物为 PCR 扩增引物，测序方法为 Sa ABI 公司的 3730XL 测序仪。析hromas 软件进行峰图分析，然后通过 NCBI 和 UCSC s 数据库进行序列比对。液病患者临床及实验室特点。

儿童急性白血病患者中，8例AML患者及38例ALL患者均无突变，成突变的 5 号染色体的 1254833 位点也未发现突变。非白血病的血液病患者中，2 例再生障碍性贫血患者 5 号染色体 1254基发生杂合突变，C 突变为 A（图 2.2），该位点距离 15 号外显子转录起游 91bp。2 例再生障碍性贫血患者均为男性重型再障患儿；年龄分别为和 9 岁 9 月；以严重的贫血和出血为主要临床表现。a) Mutation locates at the 53rdsite. c) Mutation locates at the 60thsite.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R725.5

【共引文献】

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本文编号：2553159