CXCR4表达在小儿神经母细胞瘤器官特异性转移中的作用及其机制研究

发布时间：2020-03-20 18:03

【摘要】：目的：建立同一病人神经母细胞瘤(NB, neuroblastoma)细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株,探讨趋化因子受体CXCR4(趋化因子受体4)的表达水平对神经母细胞瘤细胞株体外侵袭能力的影响。 方法：建立同一病人神经母细胞瘤(NB, neuroblastoma)细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株,探讨趋化因子受体CXCR4(趋化因子受体4)的表达水平对神经母细胞瘤细胞株体外侵袭能力的影响。 结果：成功建立了同一病人神经母细胞瘤(NB, neuroblastoma)细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株,CXCR4蛋白在筛选出的细胞株QDDQ-NM a中的表达明显高于细胞株QDDQ-NM e, P0.01;CXCR4 mRNA在QDDQ-NM a中的表达明显高于细胞株QDDQ-NM e, P0.01。QDDQ-NM a的体外趋化侵袭能力强于QDDQ-NM e,差异具有显著性统计学意义,P0.01,其与CXCR4蛋白和CXCR4 mRNA表达水平呈正相关。 结论：同一病人神经母细胞瘤细胞系中的细胞具有异质性,同一病人神经母细胞瘤细胞系来源的不同细胞株侵袭能力不同,神经母细胞瘤细胞株高度的体外侵袭能力与CXCR4的高表达呈高度相关性。 目的：构建趋化因子受体4(CXCR4)小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,研究其对体外神经母细胞瘤侵袭能力的影响。 方法：选择CXCR4高表达的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系,设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的3条双链DNA序列,克隆到真核表达载体pSilencerTM neo中构建siRNA表达载体,体外脂质体介导转染SH-SY5Y细胞,用半定量RT-PCR分析CXCR4基因mRNA的变化,用免疫组织化学和Western blot分析CXCR4蛋白表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。 结果：成功构建了CXCR4-siRNA表达载体,转染后半定量RT-PCR检测神经母细胞瘤细胞CXCR4mRNA丰度分别为siRl转染组0.32±0.09、siR2转染组0.35±0.13和siR3转染组0.33±0.11,相对于对照组0.58±0.13表达下降(P0.05)；转染后免疫组化检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siRl转染组75.98±4.81、siR2转染组75.52±3.95和siR3转染组76.35±6.51,相对于对照组92.196±3.89表达下降(P0.01)；转染后Western blot检测神经母细胞瘤细胞CXCR4的蛋白表达分别为siR1转染组0.1103±0.0023、siR2转染组0.1203±0.0015和siR3转染组0.1308±0.0018,相对于对照组0.4832±0.0012表达下降(P0.01)；且转染后神经母细胞瘤细胞侵袭能力较对照组53.11±3.72降低(P0.05),siRl转染组为25.48±2.81、siR2转染组为30.89±2.77、siR3转染组为18.83±1.79。 结论：CXCR4-siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制神经母细胞瘤细胞的体外侵袭能力,有望为神经母细胞瘤的基因治疗开辟新途径。
【图文】：

(图4)6孔板中的单细胞克隆集落(200X)1cxCR4蛋白在5株单克隆细胞株中的表达(平均灰度澎DQ一NMa5.69QDDQ一眼bQDDQ一哪eQDDQ一NMdQDDQ一NM89·7955.2一80·1170.8

3.CXCR4mRNA的表达 CXCR4mRNA在5株单克隆细胞株中的表达见表2，QDDQ一NMa和QDDQ一NMe有显著性差别(图11)。表 2CXCR4InRNA在5株单克隆细胞株中的表达(条带的相对值)QDDQ一咖 aQDDQ一咖 bQDDQ一 NMeQDDQ一NMdQDDQ一NMe 2.55 2.09 2.072.02相对值2.34 2.232.21 2.25 2.11 2.362.252.192.231.91二 2.0622.0561.828 2.264 2.09QDDQ一NMa和QDDQ一NMQDDQ一NMd和QDDQ一NMe样本均数的差别有非常显著性统计学意义，e样本均数的差别有显著性统计学意义，P<0 P(0.01:.05;其余各组样木均数两两比较差别没有显著性统计学意义，，P>0.05。…覆碳…含钾.县}，l盆蓝晚(图11)QDDQ一NMa和QDDQ一 NMeCXCR4mRNA表达1泳道为阴性对照组;2泳道为QDDQ一 NMaCXCR4mRNA表达;3泳道为QDDQ一NMe CXCR4mRNA表达;4，5泳道为内参
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R739.4

【参考文献】

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本文编号：2591988