儿童骨髓间充质干细胞体外对T细胞和造血干细胞的作用及移植治疗造血损伤的实验研究

发布时间：2020-03-22 16:21

【摘要】：目的:研究儿童骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMSC)在体外对T 淋巴细胞和造血干细胞的作用及移植治疗造血损伤的可行性。 方法:收集正常儿童骨髓单个核细胞贴壁培养,取第三代后的细胞,通过流式细胞仪检测表型;将其按1.0×10~3、1.0×10~4分别与活化T 淋巴细胞共培养,通过3H-TdR掺入,β液闪计数,分析其对T 淋巴细胞增殖的影响;分别用1.0×10~3、1.0×10~4、1.0×105 个BMSC 培养后的上清液在24 孔趋化板中对T 淋巴细胞和脐血CD34+细胞进行趋化;分别用1.0×103、1.0×104BMSC 作为饲养层,建立脐血单个核细胞培养体系,观察其对造血干/祖细胞的数量及CFU-GM、CFU-E、CFU-GEMM 集落的扩增效率;将SCID 小鼠经60Co2.5Gy 照射后,建立造血损伤模型,将Hoechst33258体外标记的BMSC 按不同数量联合脐血单个核细胞移植给造血损伤的SCID 小鼠,观察第21 天小鼠存活率及外周血白细胞和血小板恢复情况。 结果:(1)儿童BMSC 易培养,流式细胞仪检测分析其高表达CD29、CD44、CD10~5,不表达CD19 、CD34、CD45;(2)在200ul 培养体系中1.0×10~3BMSC 促进10×10~5T淋巴细胞增殖,而1.0×104BMSC 对1.0×105T 淋巴细胞增殖起抑制作用;(3)不同数量级BMSC 培养三天后的上清液对T 淋巴细胞和脐血CD_(34)~+细胞均有趋化作用,但以1.0×10~5的作用最强; (4) 在200μl 培养体系中,以1.0×10~4BMSC 作为饲养层的培养体系对造血干祖细胞及集落扩增效率较高,培养早期(第8 天) CD_(34)~+细胞扩增明显,培养后期(第15 天)则主要向定向祖细胞分化;(5)移植实验发现,在相同的植活率下,较高数量(1.0×105)的BMSC 联合脐血单个核细胞移植,可降低一个数量级的造血单个核细胞用量,提高小鼠存活率,加快外周血白细胞的回升。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R725.5

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本文编号：2595301