一种新的GPⅡb基因540A缺失移码突变引起的血小板无力症

发布时间：2020-03-23 23:32

【摘要】：目的:为了明确1例血小板无力症患者发生的分子机制。方法:用40对引物对血小板无力症患者GPⅡb/Ⅲa(αIIbβ3)基因的45个外显子序列及其剪切点进行全长扩增,用SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对扩增产物进行基因突变筛选,将筛选出的PCR产物进行直接测序。结果:患者GPⅡb基因Exon4的PCR产物经SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳后出现异常条带,PCR产物直接测序显示GPⅡb基因540A缺失导致后面的氨基酸编码发生移码突变。结论:GPⅡb基因540A缺失发生移码突变是GPⅡb基因的一种新突变,是血小板无力症发病的分子基础之一。
【图文】：

基因扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳,免疫印迹,患者

作由上海博亚生物技术有限公司完成。2　结　　果2. 1　免疫印迹　　图1和图2显示,与正常人比较,患者GPⅢa表达减少,而GPⅡb几乎不表达。2. 2　基因扩增　　用40对引物扩增患者GPⅡb/Ⅲa基因的45个外显子,均可见阳性条带。2. 3　SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳　　以正常人为对照,将患者GPⅡb/Ⅲa基因的45个外显子的40份基因扩增产物分别与正常人相应的基因扩增产物同时进行SSCP-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果发现患者Ex-on4基因扩增产物电泳迁移率有异常(图3)。图1　血小板无力症患者GPⅢa蛋白表达　　1:正常人; 2:病人父亲; 3:病人母亲, 4:病人Fig.1GPⅢa expression in the patientwithGlanzmann thrombasthenia　1:Normal people; 2: Patient’s fa-ther;

正常人,病人,基因

因Exon4的540A缺失,导致后面的氨基酸编码发生移码突变,并最终在181位氨基酸后出现终止密码TGA(图4)。图4　GPⅡb基因Exon4部分序列分析图　　A:正常人;B:病人Fig.4DNA sequencing of GPⅡbExon4 mutation　　A:Normal people;B: Patient3　讨　论血小板膜GPⅡb /Ⅲa复合物是血小板膜上一种主要的黏附蛋白受体,属于整合素超基因家族成员,可以结合纤维蛋白原、血管性血友病因子(von wilebrand factor, vWF)和纤维连接蛋白等多种黏附分子,在血小板黏附聚集过程中起关键作用。GPⅡb /Ⅲa是在钙离子参与下以1∶1比例构成的复合物,是一个完整的功能单位。GPⅡb或Ⅲa任一亚基发生突变都会影响复合物的形成及细胞表面的表达,从而导致血小板无力症。GPⅡb和GPⅢa的基因都定位于17号染色体上q21-23片段内, GPⅡb基因约17 kb

【参考文献】