血管内皮生长因子对肺泡Ⅱ型细胞影响的实验研究

发布时间：2020-03-26 18:11

【摘要】：目的 众所周知,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)是一种血管生成剂。是否有其它作用,目前尚不清楚。本课题着重研究VEGF对肺发育的影响,特别是VEGF是否能促进肺泡Ⅱ型细胞(alveolar epithelial cellsⅡ AEC Ⅱ)发育、增加肺泡表面活性物质结合蛋白(肺泡活性蛋白surfactant protein SP)表达和肺泡表面活性物质(pulmonary surfactant PS)合成和分泌,探讨血管内皮生长因子对肺泡活性蛋白和肺表面活性物质代谢的影响。 方法 孕21天Wistar大鼠剖腹取胎鼠,不同消化方法分离纯化肺泡Ⅱ型细胞,原代培养的肺泡Ⅱ型细胞进行试验分组:①VEGF-165组:VEGF-165 6ng/ml;②地塞米松组:地塞米松10~(-7)mmol/L;③VEGF-165和地塞米松联合应用组:VEGF-165 6ng/ml和地塞米松10~(-7)mmol/L;④不加VEGF-165和地塞米松的DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Media)对照组。SABC法检测肺泡Ⅱ型细胞VEGF及其受体Flk-1、Flt-1和SP-B的表达,总磷脂含量测定,薄层层析法定量检测肺泡表面活性物质中卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰甘油各种成份的含量。 结果 原代培养AECⅡ,纯度可以达到89%,细胞活力高达91.85%以上,不同浓度胰蛋白酶消化法分离肺组织,所得AECⅡ纯度、活力、产量同样能够满足体外研究AECⅡ功能的需要。VEGF-165组:总磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰甘油是(μg/ml):119.8±5.1、58.7±2.1、29.5±0.58、6.1±0.2,VEGF、Flk-1、Flt-1、SP-B阳性表达;地塞米松组:总磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰甘油分别是(μg/ml):84.1±10.3、41.1±4.04、22.6±1.05、4.97±0.12,VEGF、Flk-1、Flt-1阴性表达,SP-B阳性表达;VEGF-165与地塞米松组:总磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰甘油是(μg/ml):143.7+7.75、56±2.25、32.2±2.01、7.0±0.15;VEGF、FIk-1、Flt-1、SP-B阳性表达;对照组:总磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰甘油是(μg/ml):43.4±5.1、25.8±1.52、14.3±1.02、3.97±0.15,VEGF阳性Flk-1、Fit-1阳性表达,SP-B阴性表达。 结论 VEGF-165单独应用与联合应用地塞米松促进肺泡磷脂合成及细胞VEGF、Flk-1、Flt-1、SP-B表达;AECⅡ正常状态VEGF、Flk-1、Flt-1阳性表
【图文】：

特异的中等纤维蛋白亚基Vimentni作为成纤维细胞的标记，波形蛋白CK作为上皮细胞源性细AEcll的标记，进行免疫组织化学检测[3J，，细胞胞浆胞核均呈淡蓝色是Vimnetni阴性的AECn，见附图3，胞浆显示粗大的棕黄色颗粒为CK阳性AECn，见附图4。两种消化方法所分离纯化的细胞在细胞纯度，细胞的活力、细胞产量和细胞生存时间上，经统计学检验无显著性差异，见附表2。4电镜检测结果电镜下可见细胞表面有短小微绒毛，胞质内富含线粒体、粗面内质网、高尔基复合体和溶酶体，还有许多分泌颗粒。颗粒大小不一，直径0.1一1脚，电子密度高，内含同心圆或平行排列的板层结构

各试验组民含量比较
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R722

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本文编号：2601784