小儿急性白血病肺耐药相关蛋白基因表达与临床意义

发布时间：2020-04-08 16:20

【摘要】： 前言 白血病是小儿时期最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着小儿的健康和生命。随着化疗方案的不断改进，白血病的完全缓解率和长期生存率已大大提高，但耐药的发生仍是导致化疗失败的主要原因。其中多药耐药(MDR)是一个重要的机制，而药物外排增多和滞留减少是MDR最常发生的现象。肺耐药相关蛋白(LRP)是继P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)之后又发现的药物转运蛋白，可以降低细胞内药物浓度，而导致耐药，，已有研究证明，LRP与白血病的耐药有关。 LRP是从非小细胞肺癌中发现的一种非糖类蛋白质，分子量约为110KD，其cDNA序列包含一个2688个bp的开放阅读框架，编码896个氨基酸的蛋白质，LRP基因位于人类染色体16P~(11.2)，LRP可能作为人的主要穹窿蛋白(MVP)参与细胞内的物质转运过程，最终导致细胞内药物浓度下降，而产生耐药。有研究认为，检测LRP基因的表达情况，可以预测耐药的发生，可以作为预测预后的指标之一。 本实验采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法，对43例急性白血病患儿共计52份标本进行LRP基因表达水平的检测，以进一步探讨儿童白血病的耐药机制及与临床分期，化疗反应和预后的关系。 实验材料 一、研究对象 1．病例组：1999年9月－以D1年5月期间在我院儿科住院患 者 43例，经 MIC分型确诊为 ALL者 28例，AML者 15例；男 29 例，女14例，年龄3刁 岁，平均8岁。共采集标本52例次，分为 初发组24例，完全缓解组19例，复发组9例。初发组中ALL 15 例，其中 B－ALL 9例，T－ALL 6例；AML 9例。复发组中＊例为 第二次复发病例＊例先后得到初发和复发两份标本，二例先后得 到完全缓解和复发两份标本。初发组中5例经系统治疗达完全缓 解，他们的缓解期标本均人组完全缓解组。 2．对照组J 例为ITP患儿骨髓。其中男6例，女4例，年龄 4－12岁，平均8岁。 二＼实验仪器和试剂 主要试剂及实验仪器：FICOll淋巴细胞分离液购于上海试剂 二厂；Trizof购于 GIBCO BRL USA；反转录试剂盒、TaqDNA聚合 酶购于上海 Sangon公司；引物由上海 Sangon公司合成；DNA marker：DL上000购于大连TAKARA公司。 实验方法 一、标本采集：于化疗前采集2毫升骨髓，并用肝素抗凝。 二、骨髓中分离单个核细胞：采用FICOll淋巴细胞分离液分离 单个核细胞。 三、RT—PCR方法检测LRP基因的表达：按照TriZOI试剂盒 说明提取总RNA，按逆转录试剂盒说明合成CDNA第一链后进行 PCR扩增。LRP和p。MG基因的CDNA引物序列分别为： Ly上游引物：5’GTC’ITC－CTGAGCTGGTGTCG 3’ LRP下游5！物：5’C皿GCC删皿GGG0CCn 3’ p。MG上游引物：5’ACCCCCAC…AAGAM 3’ p。MG下游引物：5’ATC’trr’nAithCCTCCAltAI’n 3’ ·2· LIp扩增片段为240hP，p。MG扩增片段为120hP。 以L矾 p。MG的比值作为LRPmmA的相对表达水平。 四、统计处理：采用F分析人检验，配对t检验，秩和检验。 实验结果 一、初发组、复发组、完全缓解组和对照组W基因的表达 LRP基因表达水平：初发组N．65。0．22入复发组O．14。 0．24入完全缓解组N．40 t 0．14X对照组①．41。0．11八初发组 和复发组分别与对照组相比，差异均非常显著门均＜o．01人完 全缓解组和对照组的差异不显著（P＞0．05人LRP基因在复发组 的表达水平明显高于初发组和完全缓解组汀均＜o．01人初发组 和完全缓解组之间差异也非常显著K＜0．01人 h人RP基因的表达与＊［C分型的关系 初发Au组（O．62 L O．25），初发AML组（0．7O L O．15），两者 差异不显著（P＞0．05）。B－＊u组（0．＊ 土O．25），T－＊u组 （O．＊。0．＊），两者差异显著（P＜0．05）。 三上RP基因表达与临床特征和临床分型的关系 初发ALL组Lgy基因表达水平在不同性别、年龄、外周血 白细胞计数以及不同的临床分型（高危、低危）之间差异均不显著 ＊均＞0．05）。 卞 论 随着人们对LRP研究的深人，I．lu在多种肿瘤上过度表达而 导致MDR现象也引起人们越来越多的关注。此前研究证明人RP 广泛分布在正常组织和肿瘤组织中，但在正常组织中其表达水平 较低，肿瘤组织中LRP表达水平较高，化疗后耐药的肿瘤组织表 ·3· 达水平更高。SchePer等研究认为LIp是一个高度保守的主穹隆 蛋白（Maior Vault Protein，MVP入与细胞的核浆转运有关，并引起 肿瘤细胞的 MDR。 我们的研究发现，对照组LRP基因表达水平较低，而在白血 病初发组和复发组中表达较高，与对照组相比，差异均显著u均 ＜0．01八复发组＊RP基因表达水平又明显高于初发组（P＜ 0．05h而完全缓解组与对照组表达水平无明显差异。提示小儿 白血病的临床耐药与LRP基因表达?
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R733.71

【共引文献】

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本文编号：2619562