【摘要】： 目的观察研究卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacillus Calmette Guerin, BCG-PSN)对急性白血病儿童外周血负载肿瘤抗原的树突状细胞(dentritic cell, DC)诱导的抗白血病作用的影响。以期提高白血病患儿抗白血病免疫效应。方法取12例完全缓解期急性淋巴细胞白血病儿童外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),以不同细胞因子和刺激物组合诱导DC。对照组：重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)+重组人白细胞介素-4 (rhIL-4)+重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α) (GIT组)：实验组分为两组：实验1组,rhGM-CSF+rhIL-4+rhTNF-α+HL-60细胞冻融全细胞抗原(antigen, Ag) (GITA组)；实验2组,rhGM-CSF+rhIL-4+rhTNF-α+HL-60细胞冻融全细胞抗原(Ag)+卡介菌多糖核酸(BCG-PSN) (GITAB组),分别诱导培养DC。光学显微镜下观察DC的形态,培养第8天获得成熟DC,并应用流式细胞仪检测各组细胞CD1a、CD83、HLA-DR表达率。后将成熟DC与急性白血病儿童自体外周血淋巴细胞加重组白细胞介素-2(rhIL-2)共培养96h诱导出CTL。将CTL与HL-60细胞共同孵育6h,观察不同组别DC对CTL杀伤HL-60细胞作用的影响,LDH释放法检测其杀伤活性。ELISA方法检测DC诱导第8天时细胞培养上清液中IL-12的含量及CTL诱导96h细胞培养上清液中IFN-γ的含量。 结果①DC培养第8天,各组90%以上的细胞表现出较为典型的树突状。②CD1a表达率实验各组与对照组比较,差别均无统计学意义(t分别为1.120、1.812，P0.05),实验2组表达率低于实验1组,差别有统计学意义(t为4.078,P0.05)；CD83的表达率实验各组均高于对照组(t分别为4.578、8.670，P0.01),实验2组表达率高于实验1组(t为4.695,P0.05),差别均有统计学意义；HLA-DR表达率实验各组均高于对照组(t分别为2.174、5.279，P0.05),实验2组表达率高于实验1组(t为2.454，P0.05),差别均有统计学意义。③LDH释放实验结果显示：效靶比20：1时,实验各组与对照组CTL对HL-60细胞杀伤活性比较,差异均有显著性(t分别为2.561,3.651,P0.05)；实验2组CTL对HL-60细胞杀伤活性高于实验1组,差别有统计学意义(t为2.222,P0.05)。④DC培养第8天上清液中IL-12含量测定和CTL诱导4天培养上清液中IFN-γ的含量测定结果显示,实验各组IL-12、IFN-β的含量均高于对照组,差别有统计学意义(IL-12,t分别为4.086、7.011, P＜0.05; IFN-γ, t分别为2.362、5.170，P0.05)；实验2组IL-12、IFN-γ的含量均高于实验1组,差别有统计学意义(t分别为2.180、2.817,P均0.05)。 结论①负载HL-60冻融全细胞抗原的缓解期白血病患儿DC较未负载DC成熟度高,分泌高水平的IL-12,可能促进Th1细胞的分化；能更有效地激活T淋巴细胞,诱生抗白血病CTL效应。②卡介菌多糖核酸能协同rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α促进急性白血病儿童外周血DC的成熟和分泌IL-12的能力,活化T淋巴细胞,进一步提高抗白血病CTL杀伤活性,从而增强儿童急性白血病外周血来源负载肿瘤抗原的树突状细胞所诱导的抗白血病免疫效应。
【图文】：
图2.5各组DC免疫表型分析比较直方图2.3OC介导的特异性抗白血病细胞毒效应经LDH释放法检测结果显示，效靶比为20:1时，各组CTL杀伤率分别对照组(30.70社10.858)%;实验l组(40.22社4.499)%;实验2组(48.66肚1%，实验各组杀伤活性高于对照组，差别均有统计学意义(t分别为2.561，，P<0.05);实验2组杀伤活性高于实验1组，差别有统计学意义(护2.222，P<(见表2.3，图2.7)。表2.2:LDH法检汤各组CTL杀伤活性(无出又n=12)Gro即GITGITAGITAB杀伤率(%)30.70社10.85840.22社4.49948.66肚11.136
图2.5各组DC免疫表型分析比较直方图2.3OC介导的特异性抗白血病细胞毒效应经LDH释放法检测结果显示，效靶比为20:1时，各组CTL杀伤率分别为对照组(30.70社10.858)%;实验l组(40.22社4.499)%;实验2组(48.66肚11.1%，实验各组杀伤活性高于对照组，差别均有统计学意义(t分别为2.561，3.6P<0.05);实验2组杀伤活性高于实验1组，差别有统计学意义(护2.222，P<0.05(见表2.3，图2.7)。表2.2:LDH法检汤各组CTL杀伤活性(无出又n=12)Gro即GITGITAGITAB杀伤率(%)30.70社10.85840.22社4.49948.66肚11.136*▲P<0.05，。.pare侧i山co.如，1group;.P<0.05，coIn脚花初thG】TAg门up
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R733.7
【参考文献】
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本文编号：
2623641
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