高胆红素血症新生大鼠脑组织激活素A、Caspase-3表达的研究

发布时间：2020-04-26 07:12

【摘要】： 目的高胆红素血症(hyperbilirubinemia)是新生儿期最常见的疾病,严重者可致死或造成中枢神经系统伤残而终生受累。激活素A(activin A,ACT A)是一种糖蛋白激素,最新研究证实,ACT A参与缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的发病过程,并且外源性ACT A对新生大鼠HIBD具有神经保护作用。Caspase-3是细胞凋亡过程中的关键酶,通过降解Caspase-3及相应底物可促进细胞凋亡。本研究采用动物实验的方法,研究新生大鼠高胆红素血症不同程度脑损伤后ACT A、Caspase-3表达的变化规律,旨在为进一步探讨高胆红素血症新生儿中枢神经系统损伤的发病机制与有效的防治措施提供实验依据。 方法将100只新生7日龄SD大鼠随机分为正常对照组(C组,n=10)和实验组(T组,n=90),T组又根据腹腔注射胆红素剂量的依次增加分为T1,T2和T3组,每组30只。C组SD大鼠腹腔注射生理盐水1.0ml,T1组SD大鼠腹腔注射胆红素50μg/g,T2组腹腔注射胆红素100μg/g,T3组腹腔注射胆红素200μg/g。各实验组根据造模结束后不同时间点(0h、4h、8h、12h、24h)分为5组,每组6只大鼠。观察各组幼鼠不同时间点的神经行为异常如抽搐、翻滚、俯伏、对外界刺激的逃避反应减弱等;检测各组幼鼠血清胆红素浓度、脑组织胆红素浓度及脑组织含水量;取各组幼鼠脑组织置4%多聚甲醛固定、常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋,冠状切片(厚4μm),常规苏木素-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色,光镜下观察组织病理改变,免疫组织化学方法检测脑组织内源性ACTA和Caspase-3的表达。数据以(?)±s表示,应用SPSS13.0软件进行统计学处理。 结果C组及T1组幼鼠于造模结束后各时间点均未见明显的神经行为异常。T2组、T3组幼鼠分别于造模后12h、8h出现翻滚、震颤、俯伏及对外界刺激的逃避反应减弱等表现,T3组幼鼠行为异常表现较T2组明显。造模结束后0h,各组幼鼠血清胆红素浓度、脑组织胆红素浓度及脑组织含水量无显著性差异(P＞0.05)。T1组血清胆红素浓度于造模后8h、12h均高于C组(P＜0.05),T1组脑组织胆红素含量、脑组织含水量及ACT A、Caspase-3表达于造模后各时间点与C组比较均无统计学意义(P＞0.05)。T2、T3组血清胆红素浓度、脑组织胆红素浓度、脑组织含水量及ACT A、Caspase-3表达于造模后各时间点均明显高于C组(P＜0.01)。脑组织胆红素浓度与脑组织含水量及脑组织ACT A、Caspase-3表达均呈正相关(r=0.876,P＜0.01;r=0.886,P＜0.01;r=0.900,P＜0.01)。C组、T1组大脑皮质、海马区神经元排列整齐,结构完整,未见胆红素沉积;T2、T3组神经元数量减少,结构紊乱,并可见不等量的胆红素沉积。ACT A阳性细胞主要出现在大脑皮质及海马区,阳性反应主要位于细胞浆及突起,胞核不着色;Caspase-3阳性细胞以神经元、神经胶质细胞为主,阳性免疫反应位于细胞核,也有一些位于胞浆及突起。 结论 1.高胆红素血症模型鼠均存在不同程度的脑损伤及神经行为异常;其程度与造模后脑组织胆红素含量成正相关。 2.高胆红素血症可诱导模型鼠脑组织Caspase-3表达增加,表明高胆红素血症可加速神经细胞凋亡。 3.高胆红素血症可诱导模型鼠脑组织ACT A表达增加,提示内源性ACT A参与了高胆红素血症所致新生大鼠脑组织损伤的发病过程,可望成为新生儿高胆红素血症及其后所致中枢神经系统损伤病情判定的敏感指标之一。
【图文】：

山东大学硕士学位论文3脑组织病理改变C组、Tl组各时间点脑组织细胞排列整齐，神经元结构完整，，均未见胆红素沉积。T2、T3组在造模结束后0h，未见胆红素沉积，神经元结构完整，神经基质无水肿;以后各时间点大脑皮层及海马等不同部位神经元数量减少逐渐明显，结构紊乱，可见细胞肿胀，核固缩、碎裂、溶解等，部分细胞呈嗜酸性变，脑组织胆红素沉积逐渐增多(见图l)。图IHE染色图片

山东大学硕士学位论文3脑组织病理改变C组、Tl组各时间点脑组织细胞排列整齐，神经元结构完整，均未见胆红素沉积。T2、T3组在造模结束后0h，未见胆红素沉积，神经元结构完整，神经基质无水肿;以后各时间点大脑皮层及海马等不同部位神经元数量减少逐渐明显，结构紊乱，可见细胞肿胀，核固缩、碎裂、溶解等，部分细胞呈嗜酸性变，脑组织胆红素沉积逐渐增多(见图l)。图IHE染色图片
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R722.1

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本文编号：2641239