重组人促红细胞生成素对窒息后血清诱导HK-2细胞线粒体形态变化所致细胞凋亡的保护作用

发布时间：2020-04-27 21:36

【摘要】： 目的：研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(human renal proximal tublar cells, HK-2)损伤的保护作用及其机制。 方法：(1)以人人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象。(2)以新生儿重度窒息(Apgar评分小于4分)后24h血清(20%体积分数)作为攻击因素。(3)先将实验分为对照组和窒息组,探讨窒息后血清诱导HK-2细胞的损伤是否有线粒体形态变化。再将实验分为对照组、窒息组和rhEPO组,探讨rhEPO对窒息后血清导致HK-2细胞损伤的保护作用及可能机制。(4)检测指标：倒置相差显微镜下观察细胞的形态学改变,Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞活力变化,免疫组织化学法观察与线粒体形态变化相关的蛋白：动力相关蛋白1 (Dynamin related protein 1, DRP1)和视神经萎缩症蛋白(optic atrophy, OPA1)的表达,透射电子显微镜观察线粒体形态变化。(6)统计学处理：所有数值以均数±标准差(x±S)表示,分别进行配对t检验和单因素方差分析组间LSD检验,采用SPSS13.0统计软件完成。P0.05为差异有显著性。 结果：(1)倒置相差显微镜下观察HK-2形态学变化：对照组细胞贴壁良好,透明度大,折光性强,呈铺路石样,为扁平的多角形,分裂相多,细胞排列紧密,连接成片,数量多,胞质中颗粒少。窒息组细胞生长缓慢,细胞数量比对照组明显减少,细胞形态发生改变,由典型的扁平多角形细胞变为不规则圆形或椭圆形,折光性减弱,轮廓增强,胞质中出现空泡,脂滴,颗粒样物质,细胞间空隙加大,连接松散,细胞间可见较多细胞碎片。rhEPO组：细胞损伤状况明显得到改善,较窒息组细胞生长状况明显好转,形态明显变好。(2)CCK-8法检测细胞活力变化：与对照组细胞活力(A值)(0.74±0.08)相比,窒息组细胞活力(0.41±0.06)明显降低,rhEPO组细胞活力(0.60±0.08)与窒息组和正常组比较,差异均有统计学意义(p0.05)。(3)免疫组织化学法测定DRP1表达：与对照组(0.24±0.03)相比,窒息组细胞DRP1表达光密度值(0.51±0.03)显著升高,rhEPO组(0.38±0.03)较窒息组有所恢复,但未恢复至对照组水平,差异有统计学意义(p0.05)。(4)免疫组织化学法测定OPA1表达：与对照组(0.47±0.02)相比,窒息组细胞OPA1表达光密度值(0.21±0.02)显著降低,rhEPO组(0.36±0.02)较窒息组有所恢复,但未恢复至对照组水平,差异有统计学意义(p0.05)。(5)投射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)观察线粒体形态变化：对照组和rhEPO组线粒体结构完整,基质分布均匀,可见线粒体嵴；窒息组线粒体出现肿胀,空泡变性,基质减少,部分嵴消失。 结论：新生儿窒息后血清可诱导HK-2细胞凋亡,其机制包括通过调节蛋白DRP1、OPA1的表达水平而影响线粒体融合与分离平衡使线粒体片段化促细胞凋亡。rhEPO可通过调节OPA1、DRP1的表达抑制线粒体分离明显减轻窒息后血清诱导的HK-2细胞的损伤。
【图文】：

图2.比EPO对窒息后血清诱导HK一2细胞活力改变的影响Fis:2仆ee伤比tofthEPOontheeellviabilityofHK，2cellsindu以沮勿PO淞砂lyxial.selum(X绍)thEPO对窒息后血清诱导HK一2细胞D即1表达的影响免疫组化检测，DRPI染色为黄褐色位于胞浆，各实验组HK.2细胞，与对照组相比，窒息组D即1的表达(OD值)明显增加，rhEPO组有明显好转，但未恢复至对照组水平，差异具有显著性意义(尸<0.

图4.比丑PO对窒息后血清诱导HK一2细胞D即1表达的影响(OD)Fig.4.仆ee蛋双ofrhEPOonexPressionofD即1inHK一2eellsindueedbypo坐些hyxial一serum(oD)4rhEPO对窒息后血清诱导HK一2细胞OPAI表达的影响免疫组化检测，OPAI染色为黄褐色位于胞浆，，与对照组相比，窒息组OPAI的表达显著减少，比EPO组较窒息组有明显好转，但未恢复至对照组水平，差异具有显著性意义(尸<0.口J)。(见图5、表3、图6)
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R722.1

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本文编号：2642679