干扰素α-1b雾化吸入治疗呼吸道合胞病毒毒感感染的实验研究

发布时间：2020-04-28 11:27

【摘要】： 目的 呼吸道合胞病毒(RSV)是全球婴幼儿下呼吸道感染的首位病毒病原体，儿童2岁前都至少感染过一次RSV[ 1 ]，多数会发生再感染，与日后发生喘息密切相关，它是严重危害婴幼儿健康的一种病毒。重组人干扰素α-1b是我国第一个自主开发的基因工程新药，据研究报告称，与国内外同类产品相比，重组人干扰素α-1b在抗病毒治疗中不仅疗效高，而且不良反应轻，中和抗体产生率低，是适合中国人使用的基因工程药物。已有实验表明重组人干扰素α-1b作为一种较为安全和不产生耐药性的广谱抗病毒制剂，在RSV感染治疗中有巨大的优势。但到目前为止，国内应用重组人干扰素α-1b治疗RSV感染，多选肌肉注射给药，儿童依从性较差，且会引起发热、肌肉酸痛等不良反应，也有关于雾化吸入此药治疗呼吸道病毒感染的临床报告，但在雾化吸入干扰素α-1b治疗RSV感染方面缺乏相关实验室依据。为此，我们建立了RSV感染的小鼠模型，观察改变给药途径后（即经雾化吸入干扰素α-1b）其在小鼠体内对RSV的抑制作用，通过与雾化吸入利巴韦林的疗效比较，探讨雾化吸入干扰素α-1b治疗呼吸道合胞病毒感染的有效性，为今后的临床试验提供理论依据。 方法 将40只BALB/c小鼠滴鼻感染RSV，制备成RSV感染模型后随机分为4组：生理盐水对照组；干扰素α-1b治疗组；利巴韦林治疗组；干扰素α-1b+利巴韦林治疗组。分别雾化吸入生理盐水、干扰素α-1b、利巴韦林、干扰素α-1b+利巴韦林。第5天各组中随机抽取5只小鼠处死，取左肺组织处理后用于光镜观察肺组织病理改变，并计算病理积分(PS)，将右肺组织处理后用于透射电镜观察；各组中其它5只小鼠处死后无菌分离气管，用生理盐水进行支气管肺泡灌洗，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），使用血球计数仪计数白细胞总数，离心处理沉淀物涂片后，按淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞形态学特点分类计数，上清液用于RSV实时荧光定量逆转录PCR的测定。 结果 1.病理学检查光镜形态学观察：三个治疗组小鼠肺病理变化较对照组明显减轻,且干扰素α-1b治疗组较利巴韦林治疗组病变更轻；经统计学处理光镜PS结果：三个治疗组较对照组显著减少，治疗组间无差异；电镜下观察：三个治疗组病理变化较对照组明显减轻。 2.细胞学检查：三个治疗组BALF白细胞计数及淋巴细胞比例显著低于对照组（P＜0.05)，干扰素α-1b治疗组和干扰素α-1b+利巴韦林治疗组无显著差异，两组均显著低于利巴韦林治疗组；各组BALF白细胞分类都以淋巴细胞为主。 3.支气管肺泡灌洗液RSV实时荧光定量逆转录PCR的测定结果：三个治疗组显著低于生理盐水对照组（P＜0.05)，干扰素α-1b治疗组及干扰素α-1b+利巴韦林治疗组无显著差异，两组均显著低于利巴韦林治疗组。 结论 本实验光镜形态学显示单用雾化吸入干扰素α-1b能明显减轻小鼠RSV肺炎的病理改变，效果同干扰素α-1b+利巴韦林，但优于单用利巴韦林；光镜病理积分显示雾化吸入干扰素α-1b、雾化吸入干扰素α-1b+利巴韦林及雾化吸入利巴韦林能显著减轻肺部病理改变，三种方法效果相同；电镜显示雾化吸入干扰素α-1b、雾化吸入干扰素α-1b+利巴韦林及雾化吸入利巴韦林能减轻小鼠肺病理改变，三种方法效果相同；BALF细胞学检查显示雾化吸入干扰素α-1b、雾化吸入干扰素α-1b+利巴韦林均可明显减少气道炎症细胞，两种方法效果相同，但显著优于单用利巴韦林；支气管肺泡灌洗液RSV实时荧光定量逆转录PCR测定结果也显示雾化吸入干扰素α-1b、雾化吸入干扰素α-1b+利巴韦林均能有效降低病毒的拷贝数，两种方法效果相同，但明显优于单独雾化吸入利巴韦林。因此单独雾化吸入干扰素α-1b与干扰素α-1b+利巴韦林合用治疗呼吸道合胞病毒感染的效果相同，但明显优于单独雾化吸入利巴韦林。故单独雾化吸入干扰素α-1b是治疗RSV感染的有效方法。
【图文】：

A： 生 理盐 水对 照 组 B： 干扰 素 α- 1 b治 疗 组 ； C： 利 巴韦 林 治疗 组 D ：干 扰 素α - 1 b+ 利 巴韦 林 治疗 组 图1 小 鼠肺 组 织光 镜 病理 学检 查 (H E ,× 4 00 ) 3. 2. 2 光 镜病 理 积 分 B 组 、 C 组、 D 组和 A 组 比 较 有 显 著 性 差 异 ，， 病 理 积分 明显 低 于 A组 ； B 组、 C 组 、D 组 三组 间 无 显著 性 差 异。 结 果 见表 1 。 表1 4组 小鼠 肺 组 织的 P S 积分 比 较 ( x ±s ) 注： 1 ） 与A 组 比 较， P ＜ 0. 0 5 组别 n PS 积 分 A组 B组 C组 D组 55552. 8 0 ± 0 .4 5 1. 0 0 ± 0 .7 1 1）1. 4 0 ± 0

3. 2. 3 电 镜下 肺 组 织 改 变 A 组： 肺 泡 壁 大 部 分 呈 破 坏 、 溶 解 状 ， 有 细胞 融合 ， 肺 泡 腔 内 富 含 细 胞 碎 片 ， 有 单 核 细 胞 和 淋 巴 细 胞 浸 润 ， 其 胞 质 中可 见大 小不 一 、形 态 各 异的 R SV 颗粒 及 R S V包 涵 体( 图2 A )； B 组 ： 肺 泡 壁结 构 仅 有部 分 破 坏 , Ⅰ 型 、 Ⅱ 型肺 泡 上 皮 细 胞 肿 胀 ， 无 细 胞 融 合 ， 单 核 细 胞 中未 见到 R S V颗 粒 及 RS V 包 涵 体( 图 2 B) ； C 组 及D 组 : 病理 变 化 同B 组 。 图 2 小 鼠肺 组织 电 镜病 理 学检 查 (× 2 00 0 0 ) 3. 3 支气 管 肺 泡灌 洗 液 结果 3. 3. 1 白 细胞 计 数 B组 、 C 组和 D组 BA L F 中 白 细 胞 总 数 及 淋 巴 细 胞 比 例 与A 组比 较 有 显著 性 差 异 ，明 显 低于 A 组 ； B 组、 D 组 B AL F 中 白细 胞 总 数 及淋 巴 细 胞比 例 无 显著 性 差 异, 两 组 与 C组 比 较 均有 显 著 性 差异 ， 明 显低 于 C 组； 各 组 BA L F白 细 胞分 类 都以 淋 巴细 胞 为主 。 结果 见 表2 。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R725.6

【参考文献】

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本文编号：2643408