外周γδT细胞的表型与功能在儿童手足口病中的变化及其临床意义

发布时间：2020-05-05 02:33

【摘要】：背景:手足口病(HFMD)是儿童常见的传染性疾病,其发病机制与多种免疫细胞的功能改变相关。γδT细胞是一种天然免疫细胞,尽管已有报道显示γδT细胞在一些病毒感染性疾病中起重要作用,但目前其在HFMD中的变化及作用还不清楚。本研究拟通过检测HFMD患儿外周血中γδT细胞的表型与功能的变化,分析γδT细胞在HFMD发病中的意义。材料与方法:1.受试对象:共纳入HFMD患儿83例,其中66例患儿用于横向研究(与健康对照(HCs)比较),17例患儿用于纵向研究(自身急性期与恢复期比较)。按照临床表现或肠道病毒(EV)71 RNA检测结果将患儿分为普通型与重症型组或EV71-与EV71+组。重症型患儿进一步细分为EV71-重症型与EV71+重症型组。同时纳入健康对照儿童26例。2.用流式细胞术检测外周血中总γδT细胞及其亚群的比例,包括Vδ1T、Vδ2T、幼稚型γδT(CD45RA~+CD27~+,γδTna?ve)、中央记忆型γδT(CD45RA~-CD27~+,γδTcm)、效应记忆型γδT(CD45RA~-CD27~-,γδTem)、效应型γδT(CD45RA~+CD27~-,γδTeff),以及产生细胞因子的γδT细胞(干扰素(IFN)-γ~+γδT,肿瘤坏死因子(TNF)-α~+γδT,CD107a~+γδT和颗粒酶(Granzyme)B~+γδT细胞)。3.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆炎性细胞因子(IFN-γ、TNF-α和白细胞介素(IL)-6)及趋化因子(单核细胞趋化蛋白(MCP)-1)的水平。4.用软件SPSS23.0统计分析γδT细胞的表型与功能在各组HFMD患儿与HCs之间或患儿急性期与恢复期之间的差异,同时分析γδT细胞及其亚群与临床指标之间的相关性。以P0.05为有统计学意义。结果:1.临床资料分析结果显示,重症型或EV71+的HFMD患儿白细胞(WBC)和中性粒细胞(N)计数均显著高于HCs,而前白蛋白(PA)水平显著低于HCs。2.γδT细胞及其亚群在HFMD患儿中的变化:2.1总γδT细胞比例在HCs和HFMD患儿间没有显著性差异。除了EV71-重症型组,各组HFMD患儿外周γδTeff细胞比例较HCs显著升高,而γδTcm细胞比例较HCs显著降低。2.2与HCs相比,重症型HFMD患儿的Vδ1T、γδTeff、IFN-γ~+γδT及TNF-α~+γδT细胞比例显著增加,而Vδ2T、γδTcm及Granzyme B~+γδT细胞比例明显减少。在EV71+的重症型HFMD患儿中,也呈现出较HCs显著升高的γδTeff、IFN-γ~+γδT和TNF-α~+γδT细胞。2.3与急性期相比,患儿恢复期的Vδ1T和γδTeff细胞比例显著下降,并恢复至相对正常水平。3.血浆细胞因子和趋化因子的表达:重症型HFMD患儿,尤其是EV71-的重症型HFMD患儿的血浆细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-6及趋化因子MCP-1水平显著高于HCs。4.相关性分析结果显示,在HFMD患儿中,IFN-γ~+γδT及TNF-α~+γδT细胞分别与γδTem和γδTeff细胞比例呈正相关,而与γδTcm细胞比例呈负相关。同时,Vδ1T细胞比例与WBC计数、IFN-γ~+γδT或TNF-α~+γδT细胞比例与N计数、TNF-α~+γδT细胞比例与PCT浓度均呈正相关,而Vδ2T细胞比例与WBC和N计数呈负相关。结论:重症型HFMD患儿外周Vδ1T和γδTeff细胞比例增加,胞内细胞因子产生增强,且与临床炎症参数呈现一定的正相关性,提示γδT细胞的Vδ1T及效应细胞亚群可能参与重症型HFMD的发生过程。
【图文】：

患儿,流式,亚群,T细胞

使用流式细胞术检测外周血 γ T 细胞及其亚型的百分比。具有代表性的流式图显示在图 1 中。为了全面分析 HCs 和 HFMD 患儿之间这些细胞比例的差异，分别根据疾病重程度或 EV71 RNA 检测结果，将 HFMD 患儿分为普通型和重症型组或 EV71-和 EV71+组。在这些 HFMD 患儿亚组和 HCs 组之间进行差异的统计学分析。如图 2 所示，我们的结果显示，外周总 γ T 细胞的比例仅在 EV71-和 EV71-重症型患儿中略微增加，ш各 HFMD 亚组和 HCs 之间均无显著性差异（图 2A-C）。у HCs 相比，HFMD 患儿 V 1T 细胞比例有增加的趋势，但仅在 HCs 和重症型HFMD 患儿之间发现显著性差异（均值，15.8％ vs 27.2％）（P=0.03）。HFMD 患儿的 V 2T 细胞比例低于 HCs（59.7％），并ш普通型（44.5％）（P=0.033）、重症型 HFMD 组（46.8％）（P=0.041）у HCs 组之间均显示出显著性差异。此外，HCs和 EV71-或 EV71+HFMD 患儿之间，，或者 HCs у EV71-重症型或 EV71+重症型HFMD 患儿之间的 V 1T 细胞和 V 2T 细胞比例没有显著性差异。

患儿,亚型,外周,细胞

图 2. HCs 和 HFMD 患儿外周总 γ T 细胞及亚型 V 1T、V 2T 细胞比例的比较分析。统计分析了 HCs（n=26），普通型 HFMD（n=21）和重症型 HFMD（n=45）组（分别为 A 和 D）之间，HCs，EV71-HFMD（n=28）和 EV71+HFMD（n=25）组（分别为 B 和 E）之间，以及HCs，EV71-重症型 HFMD（n=19）和 EV71+重症型 HFMD（n=17）组（分别为 C 和 F）之间的 γ T、V 1T 或 V 2T 细胞比例的差异。数据显示为平均值±SEM。（*P<0.05）。Fig. 2. Proportions of peripheral γ T cells, subset V 1 T and V 2 T cells in the HCs group andHFMD patients. Differences in percentage of γ T, V 1 T or V 2 T cells were statisticallyanalyzed among HCs (n=26), mild HFMD (n=21) and severe HFMD (n=45) groups (A and D,respectively), among HCs, EV71- HFMD (n=28), and EV71+ HFMD (n=25) groups (B and E,respectively), and among HCs, EV71- severe HFMD (n=19) and EV71+ severe HFMD (n=17)groups (C and F, respectively). Data are shown as the mean ±SEM. ( P<0.05).3.3 重症型 HFMD 患儿 γ Teff 细胞比例增加效应细胞是直接发挥功能的免疫细胞，如图 1 所示，通过流式细胞仪检测表
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R725.1

【相似文献】